【摘要】：結(jié)核分枝桿菌含有豐富的MazEF毒素-抗毒素系統(tǒng),已有的研究已經(jīng)證實它們在病原菌免疫逃避和持續(xù)性感染過程中發(fā)揮重要作用,但這些不同MazEF系統(tǒng)之間是否能夠協(xié)同調(diào)控結(jié)核分枝桿菌在惡劣的宿主細胞環(huán)境中存活等還不清楚。研究這些MazEF蛋白之間的相互作用網(wǎng)絡(luò),以及它們與重要靶蛋白之間的功能偶聯(lián)關(guān)系對于闡明這些機制具有重要意義。 本論文系統(tǒng)研究了結(jié)核分枝桿菌7對MazEF蛋白之間的相互作用關(guān)系,以及這種相互作用對拓撲異構(gòu)酶Rv3646c(TopA)活性和毒素蛋白(MazF)的ssRNA切割功能的調(diào)控影響,具體結(jié)果如下：(1)通過細菌雙雜交實驗,構(gòu)建了結(jié)核分枝桿菌7對MazEF蛋白之間以及它們與TopA之間的相互作用網(wǎng)絡(luò),進一步采用Pull-Down和Western blot方法驗證了Rv1495與TopA及其它MazEF之間的物理相互作用。(2)分別鑒定了MazE,MazF以及它們的復合體蛋白對TopA松弛超螺旋質(zhì)粒功能的影響,發(fā)現(xiàn)了MazE和MazF能夠通過形成復合體相互抑制它們的這種調(diào)控功能。(3)鑒定了MazF以及它們的復合體蛋白的ssRNA內(nèi)切酶活性,發(fā)現(xiàn)了MazE和MazF也能夠通過形成復合體抑制MazF的這種功能。(4)采用隨機突變結(jié)合細菌雙雜交技術(shù)鑒定了Rv1495與Rv0660c和TopA相互作用的必要的氨基酸位點,這些Rv1495突變蛋白也喪失了對拓撲異構(gòu)酶功能的抑制活性。 本研究首次構(gòu)建了結(jié)核分枝桿菌7對MazEF蛋白之間的互作網(wǎng)絡(luò),發(fā)現(xiàn)了不同MazEF蛋白之間的交叉調(diào)控關(guān)系,這些結(jié)果為進一步闡明結(jié)核分枝桿菌不同MazEF系統(tǒng)之間的協(xié)同作用機制奠定了基礎(chǔ),同時也為揭示該病原菌獨特的持續(xù)感染和致病機制提供了重要線索。
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【參考文獻】

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1 王曉蕾;趙龍旋;張俊杰;;細菌毒素-抗毒素系統(tǒng)的研究進展[J];生物化學與生物物理進展;2008年09期

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本文編號：2530353