【摘要】：目的:研究高糖對乳鼠心肌細胞凋亡的影響及其機制。方法:分離培養(yǎng)SD乳鼠心肌細胞,分別用10-50 mmol/L終濃度的葡萄糖進行干預,MTT測定各組心肌細胞的生長活力;激光共聚焦顯微鏡、脫氧核糖核酸轉移酶原位缺口末端標記法(TUNEL)和流式細胞術用于觀察和檢測心肌細胞凋亡;將心肌細胞分為3組:對照組、高糖組和抗氧化劑組,分別檢測各組上清液中乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌細胞的氧化應激水平;熒光定量PCR檢測高糖對凋亡相關基因P53、Pax3、Bmp4、Slug和Msx1表達的影響。結果:MTT結果顯示高糖能濃度依賴性地抑制心肌細胞的生長活力;激光共聚焦顯微術、TUNEL染色和流式細胞術均表明高糖能誘導心肌細胞凋亡;與對照組相比,高糖組LDH、MDA含量明顯增高,SOD含量顯著下降;與高糖組相比,抗氧化劑組LDH、MDA含量明顯下降,SOD含量顯著上升;抗氧化劑組LDH、MDA、SOD的含量較對照組無明顯變化;流式細胞檢測顯示高糖組細胞凋亡率較對照組明顯增加,而抗氧化劑組細胞凋亡率較高糖組則顯著下降;熒光定量PCR結果表明高糖能上調P53、Msx1基因的表達,下調Pax3、Bmp4、Slug基因的表達。結論:高糖可能通過氧化應激和改變凋亡相關基因的表達從而誘導心肌細胞凋亡。 目的:研究尼古丁對乳鼠心肌細胞凋亡的影響及其機制。方法:分離培養(yǎng)SD乳鼠心肌細胞,分別用0.1-100μM終濃度的尼古丁進行干預,MTT測定各組心肌細胞的生長活力;激光共聚焦顯微鏡、脫氧核糖核酸轉移酶原位缺口末端標記法(TUNEL)和流式細胞術用于觀察和檢測心肌細胞凋亡;將心肌細胞分為3組:對照組、尼古丁組和抗氧化劑組,分別檢測各組上清液中乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌細胞的氧化應激水平;熒光定量PCR檢測尼古丁對凋亡相關基因P53、Bax、Bcl-2、Pax3、Bmp4、Slug和Msx1表達的影響。結果:MTT結果顯示尼古丁能濃度依賴性地抑制心肌細胞的生長活力;激光共聚焦顯微術、TUNEL染色和流式細胞術均表明尼古丁能誘導心肌細胞凋亡;與對照組相比,尼古丁組LDH、MDA含量明顯增高,SOD含量顯著下降;與尼古丁組相比,抗氧化劑組LDH、MDA含量明顯下降,SOD含量顯著上升;抗氧化劑組LDH、MDA、SOD的含量較對照組無明顯變化;流式細胞檢測顯示尼古丁組細胞凋亡率較對照組明顯增加,而抗氧化劑組細胞凋亡率較尼古丁組則顯著下降;熒光定量PCR結果表明尼古丁能上調P53、Bax和Msx1基因的表達,下調Bcl-2、Pax3、Bmp4和Slug基因的表達。結論:尼古丁可能通過氧化應激和改變凋亡相關基因的表達誘導心肌細胞凋亡。
【圖文】：

圖 1 培養(yǎng) 72h 后的心肌細胞形態(tài)（×400）度葡萄糖對心肌細胞生長活力的影響顯示，10 mmol/ L濃度組與對照組間的細胞活力無統(tǒng)L濃度組的細胞活力較對照組明顯下降(P < 0.01)，且選取最低有效濃度 20 mmol/L作為葡萄糖實驗濃度。不同濃度葡萄糖對心肌細胞生長活力的影響 (x ±s, 葡萄糖濃度(mmol/L) A 值 P 值0.506±0.01610 0.502±0.015 0.23620 0.461±0.011* 0.000

南京醫(yī)科大學碩士學位論文三、激光共聚焦顯微鏡觀察心肌細胞凋亡細胞爬片經 Annexin V/PI 雙染后置于激光共聚焦顯微鏡下觀察。高糖組可見明顯的細胞凋亡，早期凋亡細胞膜呈綠色熒光,細胞核不著色；中晚期凋亡細胞膜呈綠色熒光,細胞核呈紅色熒光。對照組為正常細胞，，僅發(fā)出微弱的綠色熒光（圖 2）。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：2529531