【摘要】： 目的 本實(shí)驗(yàn)探討了神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)對(duì)體外培養(yǎng)的新生鼠神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的影響,以及神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)軸突形成和生長(zhǎng)的作用。 方法 1、材料:2-3天的新生SD大鼠,均由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 2、主要試劑:DMEM/F12(1∶1)培養(yǎng)基、B27因子、EGF因子、bFGF因子、NGF因子和Nestin、NSE、GFAP免疫化學(xué)試劑盒。 3、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果判定:體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞。培養(yǎng)過程中通過光學(xué)顯微鏡觀察干細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。再通過Nestin、NSE和GFAP免疫組化染色對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。繼續(xù)進(jìn)行分組分化培養(yǎng)(10%FBS組作為對(duì)照組,NGF+10%FBS組作為實(shí)驗(yàn)組;),分化培養(yǎng)6天后對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行NSE免疫組化染色,并對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的NSE陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù),求得NSE陽性細(xì)胞數(shù)。通過對(duì)神經(jīng)元附加同心圓對(duì)細(xì)胞軸突的數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差表示,P＜0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:所培養(yǎng)出的細(xì)胞團(tuán)均為Nestin陽性,誘導(dǎo)分化后均可產(chǎn)生NSE和GFAP陽性細(xì)胞。分組分化培養(yǎng)后NGF組中神經(jīng)元所占比例為12.93±2.4,對(duì)照組神經(jīng)元所占的比例約為5.83±1.7,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。對(duì)兩組神經(jīng)軸突的數(shù)量進(jìn)行分析后,NGF組中單個(gè)神經(jīng)元的軸突數(shù)量平均為8.9±0.9,對(duì)照組中單個(gè)神經(jīng)元軸突數(shù)量平均為3.9±0.2,對(duì)兩組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,結(jié)果具有差異性(P＜0.01)。 討論 神經(jīng)干細(xì)胞因具有高度自我更新能力、多潛能分化、低免疫原和遷移功能等特性。本次試驗(yàn)通過對(duì)不同培養(yǎng)階段的細(xì)胞進(jìn)行觀察,原代培養(yǎng)第二天開始出現(xiàn)細(xì)胞克隆團(tuán),此細(xì)胞團(tuán)體積不斷擴(kuò)增而且數(shù)量也在不斷增多。傳至第4代時(shí)進(jìn)行單克隆培養(yǎng),單克隆細(xì)胞團(tuán)經(jīng)過Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示均成呈陽性,而且經(jīng)過分化培養(yǎng)后均能產(chǎn)生NSE和GFAP陽性細(xì)胞。這些都表明了所培養(yǎng)細(xì)胞是具有高度自我復(fù)制能力和分化能力的神經(jīng)干細(xì)胞。對(duì)此神經(jīng)干細(xì)胞分組分化培養(yǎng),并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)算NSE陽性細(xì)胞數(shù)的結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組NSE陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組,這一結(jié)果也證實(shí)了NGF可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元。 本次試驗(yàn)還觀察了在神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化過程中NGF對(duì)軸突生長(zhǎng)的作用,結(jié)果顯示加入NGF的實(shí)驗(yàn)組中的軸突數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)照組。這說明NGF在神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化過程中,能夠促進(jìn)那些未長(zhǎng)出軸突的神經(jīng)細(xì)胞向極化狀態(tài)轉(zhuǎn)變并增加生長(zhǎng)錐的生成,最終增加分化后神經(jīng)元軸突數(shù)量。 通過將本次試驗(yàn)與其它關(guān)于NGF促進(jìn)軸突生長(zhǎng)和再生的實(shí)驗(yàn)相聯(lián)系,不難推測(cè):神經(jīng)元在初期生長(zhǎng)出生長(zhǎng)錐和軸突的機(jī)制與后期軸突出芽、分枝和再生的機(jī)制可能基本相同,即使這兩個(gè)機(jī)制不相同,也有一點(diǎn)不可否認(rèn),就是這兩種機(jī)制均能能夠被NGF所啟動(dòng)。下一步實(shí)驗(yàn)應(yīng)該進(jìn)一步研究NGF在此過程中所采用的是什么樣的信號(hào)傳到途徑,究竟引發(fā)了什么樣的具體機(jī)制來促進(jìn)神經(jīng)元初期軸突的形成和生長(zhǎng),這將對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用于臨床有重大意義。 結(jié)論 NGF可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元,還可以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化的神經(jīng)元軸突數(shù)量的增加。
【圖文】：

孔中連續(xù)觀察5個(gè)NSE染色陽性的未與其它神經(jīng)元助于如圖所示的以神經(jīng)元為圓心的同心圓，分別計(jì)數(shù)米圓環(huán)內(nèi)的突出數(shù)量[7]。將兩者均值視為神經(jīng)元突觸驗(yàn)(P<0.05)，比較組間軸突數(shù)量有無顯著差異。

將單克隆神經(jīng)干細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色，絕大多數(shù)細(xì)胞均呈陽性反映。細(xì)胞團(tuán)由成百上千個(gè)Nestin陽性細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞團(tuán)周圍可見少量的散在的Nestin陽性細(xì)胞，，形狀多成三角形。(如圖3A)。對(duì)誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞分別進(jìn)行GFAP(如圖3B)和NSE染色(如圖3C)，均有染色陽性細(xì)胞存在。圖3，免疫細(xì)胞化學(xué)染色(X加0)。圖3A:神經(jīng)干細(xì)胞團(tuán)的Nestin染色;圖3B:神經(jīng)干細(xì)胞分化后G凡J染色;圖3C:神經(jīng)干細(xì)胞分化后NSE染色;三、神經(jīng)元數(shù)量及軸突長(zhǎng)度和數(shù)量的比較結(jié)果誘導(dǎo)分化后第一天可見一定數(shù)量的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，并可見少量的放射狀軸突，繼續(xù)觀察，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞不斷增多，軸突數(shù)量及長(zhǎng)度也在不斷增長(zhǎng)。誘導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉佳梅;陳東;孟曉婷;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元的分化[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2005年06期

2 劉小龍;李宏慧;董明敏;;神經(jīng)干細(xì)胞與神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)豚鼠損傷內(nèi)耳保護(hù)效果的比較[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年51期

3 靳曉亮;李京紅;關(guān)方霞;杜英;樊銳太;;大鼠神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)條件下GDNF及NGF的分泌特點(diǎn)[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2009年02期

4 周華威;趙寶東;文普帥;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)局灶性腦缺血神經(jīng)干細(xì)胞巢蛋白表達(dá)及細(xì)胞類型的影響[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年07期

5 周華威;趙寶東;;NGF對(duì)大鼠局灶性腦缺血后腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的影響[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年05期

6 烏優(yōu)圖;王運(yùn)杰;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化及神經(jīng)元軸突形成的影響[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年29期

7 李寶園;楊德兵;豐玲;王雁春;郭敏芳;馬存根;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用研究[J];山西大同大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年02期

8 蘇肖英;汪海濤;孟茜;鄭文華;;不同生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年09期

9 成松明;馬敏敏;徐格林;劉新峰;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育的調(diào)節(jié)[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2008年03期

10 范廣明;張文彬;張賽;王麗君;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年14期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉偉國(guó);羅鳴;鄭學(xué)勝;陳向日;楊小鋒;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子與神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合移植治療顱腦損傷的療效研究[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

2 孫一睿;胡錦;王爾松;奚才華;姚海軍;;單層黏附培養(yǎng)技術(shù)在哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞體外穩(wěn)定增殖和多向分化中的應(yīng)用[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李力;萬琪;劉永紅;張巍;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對(duì)其增殖、分化的影響[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

4 田東萍;蘇敏;吳賢英;張舸;;硒、B-27在神經(jīng)干細(xì)胞球存活與分化中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

5 楊華靜;徐鵬;張?zhí)K明;;低濃度β-淀粉樣蛋白對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的作用機(jī)制研究[A];第十一屆全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

6 文玉軍;王登科;孫征;劉海洋;張蓮香;秦毅;;成年和老年大鼠腦出血后海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞的變化[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

7 張波;王任直;;腦梗死后神經(jīng)干細(xì)胞原位增殖及其機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國(guó)微循環(huán)學(xué)會(huì)第五屆中國(guó)微循環(huán)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

8 邢雪松;呂威力;;Wnt-1在大鼠腦缺血再灌注海馬組織內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞早期增殖分化中的作用[A];創(chuàng)新沈陽文集（B）[C];2009年

9 朱慧;李曉紅;戚菁;施維;吳信華;陸玉華;鞠少卿;劉炎;;Pax3負(fù)性調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞分化過程中膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達(dá)[A];2010’全國(guó)腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第五屆中國(guó)中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

10 李革飛;李劍平;;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞表面標(biāo)志物-Nestin[A];中國(guó)輸血協(xié)會(huì)第五屆輸血大會(huì)論文專集（摘要篇）[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 時(shí)仲省 高思敏;移植神經(jīng)干細(xì)胞 癱瘓兔子可爬行[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2001年

2 王成應(yīng);能克隆的神經(jīng)干細(xì)胞被分離[N];健康報(bào);2004年

3 孫國(guó)根;神經(jīng)干細(xì)胞并非“全能制造者”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

4 劉海英;腦癌源于腦下室區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

5 孫國(guó)根　白毅;靈長(zhǎng)類腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

6 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

7 北京康復(fù)中心神經(jīng)外科 黃紅云;神經(jīng)干細(xì)胞之謎[N];健康報(bào);2008年

8 記者 吳苡婷;為腦損傷患者治療打開希望之門[N];上�？萍紙�(bào);2009年

9 劉霞;美將成人皮膚細(xì)胞變成神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 ;英研究用神經(jīng)干細(xì)胞治療中風(fēng)[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄭敏;神經(jīng)干細(xì)胞定向分化與移植治療帕金森病的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

2 盧洪流;成年大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的在體研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

3 李巍;神經(jīng)干細(xì)胞的分化調(diào)控及BDNF基因修飾后對(duì)大鼠脊髓損傷修復(fù)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

4 張力;人胚神經(jīng)干細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植治療帕金森病恒河猴模型的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

5 戴宜武;骨髓基質(zhì)細(xì)胞定向分化為神經(jīng)干細(xì)胞及自體移植治療中腦損傷研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 張所軍;神經(jīng)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤干細(xì)胞遷移及對(duì)其生長(zhǎng)特性的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

7 張?jiān)诮?神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦創(chuàng)傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 尹豐;人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞治療帕金森病的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 譚太貴;多通道PLGA脊髓再生介導(dǎo)管道治療大鼠脊髓半橫斷損傷[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

10 高國(guó)一;胎鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞鑒定純化與生物學(xué)特性觀察[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫劍瑞;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響[D];鄭州大學(xué);2005年

2 烏優(yōu)圖;神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的分化以及對(duì)神經(jīng)元軸突形成的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

3 王薇;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)EAE大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞增殖及向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

4 馮年花;人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2010年

5 宋精梅;比較新生大鼠腦部不同部位的神經(jīng)干細(xì)胞被誘導(dǎo)分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞的差異[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

6 李政;內(nèi)皮祖細(xì)胞調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞分化及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 王念;絞股藍(lán)皂苷對(duì)脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響[D];陜西師范大學(xué);2011年

8 劉朋;海藻酸鈣/明膠微膠珠的制備及在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用[D];大連理工大學(xué);2011年

9 郭兵;大鼠羊膜上皮細(xì)胞體外向類神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化及其移植后對(duì)視神經(jīng)再生的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 吳琿;神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存及其生物學(xué)特性的研究[D];大連理工大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2527577