【摘要】： 目的 受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES)是趨化因子超家族成員,該分子生物學(xué)功能復(fù)雜多樣。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)RANTES存在于正常成人的精液中,但其組織細(xì)胞來(lái)源尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谙到y(tǒng)地研究RANTES在男性生殖系統(tǒng)內(nèi)的表達(dá)及意義。 方法 1.利用聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡雜交(Western blot)、原位雜交、免疫組織化學(xué)及免疫熒光等方法,觀察RANTES及其受體在成年男性生殖系統(tǒng)內(nèi)的表達(dá)和分布情況。 2.根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,利用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量RT-PCR,Western blot及免疫組織化學(xué)等方法,觀察RANTES在小鼠附睪內(nèi)的表達(dá)分布。利用Western blot檢測(cè)在小鼠發(fā)育不同階段(7、14、21、28、35、42、49、56和140天)RANTES表達(dá)水平的變化。 3.分離純化小鼠附睪各段精子,利用免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)等方法確定RANTES結(jié)合精子的部位及結(jié)合量。 結(jié)果 1.RT-PCR結(jié)果顯示RANTES mRNA在人前列腺和附睪有表達(dá),但在睪丸和精子未見(jiàn)表達(dá)。Western blot檢測(cè)到RANTES蛋白在人附睪頭部及尾部有高表達(dá),在體部表達(dá)相對(duì)較低。原位雜交與免疫組化結(jié)果提示,表達(dá)RANTES的細(xì)胞為輸出小管的纖毛細(xì)胞、附睪管的狹窄細(xì)胞、頂細(xì)胞和基細(xì)胞。免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)利用特異性細(xì)胞標(biāo)記物,進(jìn)一步證實(shí)了RANTES在附睪上皮的細(xì)胞定位。此外,RANTES受體CCR1和CCR5 mRNA在附睪均有表達(dá),原位雜交及免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)表明CCR5受體在附睪上皮廣泛表達(dá)。 2. RT-PCR結(jié)果提示RANTES mRNA在小鼠附睪都有表達(dá),免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)證明RANTES表達(dá)于小鼠輸出小管的纖毛細(xì)胞、附睪管的狹窄細(xì)胞和頂細(xì)胞。實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot證明RANTES表達(dá)量在小鼠附睪頭部最高,體部較少,尾部幾乎檢測(cè)不到。Western blot顯示RANTES在小鼠出生后第28天開始出現(xiàn),35天表達(dá)迅速升高,之后表達(dá)量逐步升高,直至出生后140天,RANTES在附睪的表達(dá)仍然保持較高水平。 3.間接免疫熒光顯示RANTES結(jié)合于附睪正常精子的尾部中段,異常精子的頭部和尾部中段。流式細(xì)胞術(shù)顯示,隨著精子在附睪內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn),RANTES與精子的結(jié)合率逐漸降低。 結(jié)論 1. RANTES表達(dá)于人輸出小管與附睪管的上皮細(xì)胞,可能參與附睪管腔內(nèi)微環(huán)境的調(diào)節(jié)。 2. RANTES在小鼠發(fā)育過(guò)程中的變化提示,RANTES可能參與精子成熟的過(guò)程的調(diào)節(jié)。 3. RANTES在人和小鼠附睪管腔內(nèi)與正常精子的結(jié)合提示,RANTES可能在受精前過(guò)程中發(fā)揮作用。與異常精子的結(jié)合提示,RANTES可能調(diào)節(jié)異常精子的免疫原性,促進(jìn)其被上皮細(xì)胞吞噬,對(duì)維持附睪內(nèi)的微環(huán)境穩(wěn)定發(fā)揮作用。
【圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文文 獻(xiàn) 回 顧ES 的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制S 的結(jié)構(gòu)性細(xì)胞因子均含有 4 個(gè)半胱氨酸 Cys 的保守基序，組。根據(jù)多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)中第 1、2 兩個(gè) Cys 之間是否將趨化性細(xì)胞因子超家族分為 CXC 亞家族（或α亞或β亞家族）。孫質(zhì)�。黑吇蜃覴ANTES在附睪的表達(dá)及功能研究

圖 1-2：RANTES 雙體結(jié)構(gòu)模式圖.能研究RANTES 最早發(fā)現(xiàn)于 1988 年，，研究者利用減差 cDNA 基因庫(kù)（subtrA library）技術(shù)鑒定了包括 RANTES 在內(nèi)的將近 50 種趨化因子及(Schall, et al., 1988)，并依據(jù)它的特性命名這種新蛋白：受激活調(diào)節(jié)胞表達(dá)和分泌因子（Regulated upon Activation Normal T Expresseeted）。根據(jù) RANTES 的趨化性質(zhì)，其免疫學(xué)分類名稱為 CCL5。RANTES 對(duì)白細(xì)胞的趨化及激活作用當(dāng)RANTES為單體或雙體或濃度為納摩爾級(jí)時(shí)，RANTES受體為C3、CCR4 和 CCR5，具有趨化活性。RANTES 對(duì)多種白細(xì)胞具有趨1）趨化單核細(xì)胞；（2）趨化未刺激的 CD4+CD45RO+記憶 T 細(xì)胞后的 CD4+和 CD4+T 細(xì)胞；（3）趨化嗜酸性粒細(xì)胞并刺激其脫顆粒
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Genetic and epigenetic risks of intracytoplasmic sperm injection method[J];Asian Journal of Andrology;2006年06期

本文編號(hào)：2525729