【摘要】： 上篇CMRF35樣分子3(CLM3)促進(jìn)TLR9觸發(fā)的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子及其相關(guān)分子機(jī)制研究 免疫識(shí)別與免疫調(diào)節(jié)的細(xì)胞與分子機(jī)制是當(dāng)前免疫學(xué)研究的重要領(lǐng)域。天然免疫系統(tǒng)是機(jī)體抗細(xì)菌、病毒等病原體入侵的“第一道防線”,而TOLL樣受體(Toll-like receptors, TLRs)以及表達(dá)TLRs的巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞是天然免疫的重要的組成部分,有關(guān)TLR參與巨噬細(xì)胞免疫識(shí)別的機(jī)制以及觸發(fā)的免疫應(yīng)答反應(yīng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的調(diào)節(jié)機(jī)制、特別是對(duì)于TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制尚不十分清楚,因此,參與TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的新的分子機(jī)制的研究備受矚目。 作為機(jī)體重要的模式識(shí)別受體(Pattern recognition receptors, PRR),TLRs主要表達(dá)于免疫細(xì)胞包括樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞表面。TLRs通過識(shí)別表達(dá)在細(xì)菌、病毒和真菌組成物上廣譜的病原體相關(guān)分子模式,啟動(dòng)宿主抗感染的天然免疫反應(yīng)。識(shí)別病原相關(guān)分子模式(Pathogen associated molecular patterns, PAMPs)后,TLRs招募胞漿內(nèi)一系列含有TIR區(qū)域的接頭蛋白,如MyD88、TIRAP (又稱作MAL)、Trif (又稱作TICAM1)和TRAM (又稱作TICAM2)。除TLR3外,TLRs家族的所有成員都可以通過MyD88依賴途徑活化,MyD88可通過活化下游的MAPKs和NF-κB來調(diào)控炎性細(xì)胞因子的分泌。TLR3和TLR4可通過活化TRIF依賴的途徑活化NF-κB, MAPKs和IRF3,誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β、IL-6和IFNβ等細(xì)胞因子。TLRs信號(hào)過度活化或負(fù)向調(diào)控不足會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫相關(guān)性疾病和炎癥性疾病,如果活化不足將導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫缺陷。目前已發(fā)現(xiàn)的一些正向調(diào)控因子,如DC-SIGN、Ras等,和負(fù)向調(diào)控因子,如A20、SHIP-1、ST2等,為維持TLRs介導(dǎo)的免疫應(yīng)答穩(wěn)定性發(fā)揮了重要的作用。由于TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)天然免疫及獲得性免疫均具有重要的調(diào)節(jié)作用,TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究對(duì)于闡明機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的機(jī)理、尋找免疫調(diào)節(jié)治療的新途徑具有重要意義,因此TLRs參與免疫識(shí)別與免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制研究是當(dāng)前免疫學(xué)研究的前沿?zé)狳c(diǎn)。 我們研究的CLM家族分子,其最早發(fā)現(xiàn)是源于CMRF35-A單抗識(shí)別的一個(gè)淋巴細(xì)胞表面抗原,該抗原分子屬于IgSF超家族成員,含有單鏈的免疫球蛋白可變區(qū)的胞外段,跨膜段和胞內(nèi)段,基因定位于人17號(hào)染色體。后來證明,此抗CMRF-35的單克隆抗體還能識(shí)別CMRF-35分子的同源分子,這些分子結(jié)構(gòu)與CMRF-35相似,可變區(qū)與CMRF-35同源,在17號(hào)染色體上成簇分布(cluster)因而命名為CD300家族。其相應(yīng)的小鼠同源分子命名為CLM(CMRF-35-Like Molecule,CLM)家族。鼠CMRF35樣分子超家族含有9個(gè)成員,位于鼠第11號(hào)染色體上,CLM1-8非常緊密地位于11E2區(qū)的250kb左右的區(qū)域,而CLM9與其他家族成員分離,位于11D區(qū)。CLM家族成員與免疫應(yīng)答、炎癥及變態(tài)反應(yīng)關(guān)系密切,首先, CLM家族成員主要表達(dá)在參與固有免疫應(yīng)答的髓系免疫細(xì)胞表面,有些成員如CLM4在脾臟等免疫器官高表達(dá),還有如CLM5在與外來抗原直接接觸的氣道和肺臟高表達(dá);其次,多數(shù)活化性受體成員如CLM5、CLM7、CLM8在抗體交聯(lián)活化后能促進(jìn)中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞分泌炎性因子,而抑制性受體成員如CLM1或CLM8則抑制炎性反應(yīng)或免疫細(xì)胞應(yīng)答;再次,許多受體成員如CLM1/5,CLM4/8,在炎癥因子等外來刺激的細(xì)胞表面表達(dá)發(fā)生變化,提示在炎癥反應(yīng)過程中起一定的正向和負(fù)向調(diào)控作用。CLM分子參與TLRs免疫識(shí)別與應(yīng)答的調(diào)節(jié)機(jī)制是值得研究的重要課題,目前基本上屬于空白點(diǎn)。 CLM3作為CLM家族的成員,其特征和功能都沒有相關(guān)報(bào)道,本研究中我們從小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中成功克隆了CLM3的全長基因,長738bp堿基,編碼245個(gè)氨基酸(a.a)的蛋白質(zhì),推測分子量為27kDa。對(duì)其氨基酸序列分析表明,該蛋白含有長17a.a的信號(hào)肽和22a.a的疏水跨膜區(qū),胞外段含有特征性的IgV功能域(domain),屬于Ig超家族成員,CLM3定位于小鼠11號(hào)染色體的11E2區(qū), CLM1-8非常緊密地位于該區(qū),而CLM9與其他家族成員分離。同源性比對(duì)發(fā)現(xiàn)與CLM3同源性較高的均為CLM家族成員,其中與CLM5和CLM1同源性最高,胞外段一致性為85%。 RT-PCR分析表明,CLM3廣泛分布于小鼠正常組織,在心、肝、脾及淋巴結(jié)等組織均有不同程度表達(dá),其中尤以淋巴結(jié)表達(dá)水平最高,在P815、Crip、RF、CT26、YAC-1、A20、3LL、Hepa、RAW264.7等細(xì)胞株中,CLM3僅在RAW264.7巨噬細(xì)胞株中表達(dá),在新鮮分離的小鼠原代的細(xì)胞中,亦驗(yàn)證了此結(jié)果,CLM3僅在腹腔巨噬細(xì)胞中表達(dá),這種在組織細(xì)胞的分布特點(diǎn)提示該分子在免疫防御中可能的功能。 由于許多炎性因子可以通過影響具有調(diào)控功能的分子的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的應(yīng)答,因此我們?cè)诒狙芯恐杏^察了TLRs配體LPS、polyI:C、CpG ODN對(duì)CLM3分子表達(dá)的影響,然而LPS(0.1μg/ml劑量刺激)、polyI:C(0.1μg/ml劑量刺激)、CpG ODN(0.3μM劑量刺激)刺激至24小時(shí),Raw264.7細(xì)胞中CLM3 mRNA的表達(dá)無明顯變化。 CLM3究竟有何功能?是否同其他CLM家族成員一樣在免疫與炎癥中發(fā)揮重要作用?是否也參與了TLRs的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)? 我們發(fā)現(xiàn),CLM3能促進(jìn)CpG ODN誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子(TNFα和IL6)的產(chǎn)生。我們將CLM3 siRNA轉(zhuǎn)染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞48小時(shí),CpG ODN(0.3μM劑量刺激)刺激6小時(shí)后,收集上清采用ELISA試劑盒測定TNF-α和IL-6表達(dá)。結(jié)果顯示,CLM3表達(dá)被干擾后,CpG ODN誘導(dǎo)的TNF-α和IL-6產(chǎn)生降低。將CLM3全長質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞,操作步驟同上,結(jié)果顯示,過表達(dá)CLM3后,CpG ODN誘導(dǎo)的TNF-α和IL-6產(chǎn)生增加。其它TLR配體如LPS刺激無明顯變化。該結(jié)果證明CLM3參與并促進(jìn)了TLR9觸發(fā)的巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)過程。 CLM3促進(jìn)了TLR9觸發(fā)的巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制如何?我們將MyD88、IRAK1、TRAF6、CLM3質(zhì)粒與TNF-α報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,24小時(shí)后檢測TNF-α報(bào)告基因活化情況。結(jié)果顯示,CLM3過表達(dá)增強(qiáng)了MyD88、IRAK1、TRAF6誘導(dǎo)的TNF-α活化;同時(shí),我們應(yīng)用TRIF、TAK1、CLM3質(zhì)粒與TNF-α報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染HEK293,24小時(shí)后檢測TNF-α報(bào)告基因活化情況。結(jié)果顯示,CLM3過表達(dá)對(duì)TRIF、TAK1誘導(dǎo)的TNF-α活化沒有顯著影響。提示CLM3能通過MyD88、IRAK1、TRAF6途徑促進(jìn)TLR9的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。經(jīng)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),CLM3通過與MyD88結(jié)合來促進(jìn)后者的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),提示CLM3可能通過促進(jìn)IRAK1和TRAF6或TRAF6和TAK1復(fù)合物的形成來促進(jìn)TLR9的信號(hào)傳遞。 我們又檢測了MAPK及NF-κB的活化情況,將CLM3全長質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞,24小時(shí)后以CpG ODN刺激,觀察MAPK的磷酸化及NF-κB的p65亞基的入核情況。應(yīng)用CpG ODN刺激過表達(dá)CLM3的巨噬細(xì)胞后,JNK、ERK的磷酸化增加,NF-κB的P65亞基較對(duì)照組入核增加,提示CLM3通過活化MAPK和NF-κB來調(diào)控細(xì)胞因子的產(chǎn)生。 綜上所述,我們克隆了屬于CLM家族的CLM3分子并對(duì)其的生物學(xué)特性及功能進(jìn)行了研究。CLM3主要在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中表達(dá),能促進(jìn)CpG ODN刺激的腹腔巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的分泌,免疫共沉淀證實(shí)CLM3通過與MyD88結(jié)合來促進(jìn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),且CLM3增強(qiáng)了CpG ODN誘導(dǎo)的MAPK、NF-κB的活化。本課題探討了CLM3對(duì)TLR9通路的細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響并初步研究了其作用機(jī)制,為免疫識(shí)別以及抗感染治療提供了一條新的途徑。 下篇CMRF35樣分子5(CLM5)促進(jìn)TLR和RLH觸發(fā)巨噬細(xì)胞分泌I型干擾素和炎性細(xì)胞因子及其相關(guān)分子機(jī)制研究 在抗病毒免疫應(yīng)答中,RLHs(RIG-I-like Helicase,RLHs)和TLRs是識(shí)別RNA病毒感染的兩大主要受體家族。迄今為止,人源TLRs家族發(fā)現(xiàn)了11個(gè)成員,鼠源TLRs家族發(fā)現(xiàn)了13個(gè)成員,它們通過識(shí)別病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),而被活化,如TLR1, TLR2, TLR4, TLR6,和TLR10識(shí)別脂質(zhì),TLR3, TLR7, TLR8, TLR9識(shí)別病毒的RNA或DNA,因此,位于細(xì)胞內(nèi)體的TLR3, TLR7, TLR8, TLR9被稱為抗病毒的TLRs。受體活化胞內(nèi)的級(jí)聯(lián)信號(hào)通路后,誘導(dǎo)下游的TNF-α,IL-6,IL-1β等炎性因子的產(chǎn)生,且TLR3, TLR7, TLR8, TLR9能誘導(dǎo)抗病毒的I型干擾素產(chǎn)生。 RLHs是細(xì)胞質(zhì)螺旋酶,包括RIG-I、Mda5和LGP2。與膜定位的TLRs不同,RLH位于細(xì)胞質(zhì)并且識(shí)別產(chǎn)生于胞質(zhì)內(nèi)的RNA。RIG-I和Mda5含有一個(gè)DExD/H盒RNA螺旋酶結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)CARD樣結(jié)構(gòu)域,LGP2缺乏CARD樣結(jié)構(gòu)域。雖然RIG-I和Mda5分別與不同的配體特異性結(jié)合,但它們都能誘導(dǎo)I型干擾素和炎癥性細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄。RIG-I主要識(shí)別ssRNA病毒,包括副粘病毒、流感病毒、VSV和日本腦炎病毒(JEV),而Mda5主要識(shí)別微小RNA病毒,如EMCV、腦心肌炎病毒和鼠腦脊髓炎病毒,另外Mda5參與識(shí)別polyI:C。LGP2根據(jù)RNA病毒類型的不同正向或負(fù)向調(diào)控RIG-I和Mda5應(yīng)答。RLR信號(hào)通路通過活化NF-κB、MAPK和IRFs誘導(dǎo)I型干擾素的產(chǎn)生。為維持機(jī)體正常的抗病毒免疫,RLR信號(hào)通路也被許多分子調(diào)控,例如TRIM25通過促進(jìn)RIG-I的泛素化正向調(diào)控抗病毒應(yīng)答(13),RNF125能與RIG-I、Mda5和IPS-I結(jié)合并促進(jìn)他們的泛素化,促進(jìn)RIG-I降解(14)。此外,Atg12 Atg5結(jié)合物直接與RIG-I和IPS-I的CARD樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合,抑制I型干擾素的誘導(dǎo)(15)。 CLM家族成員CLM5又名CD300d、DIgR1、MAIR-II、LMIR4。CLM5的跨膜區(qū)含有一個(gè)帶負(fù)電荷的谷氨酸,胞內(nèi)段很短且沒有任何已知保守基序。RT-PCR證實(shí)CLM5主要表達(dá)在樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒等髓系細(xì)胞中,但在淋巴系細(xì)胞中幾乎沒有表達(dá)。用Flag標(biāo)記的CLM5轉(zhuǎn)染RAW巨噬細(xì)胞后,抗FLAG抗體交聯(lián)活化,引起受體下游P38、ERK1/2和JNK發(fā)生磷酸化,且交聯(lián)活化的CLM5/RAW264.7細(xì)胞發(fā)生纖維化形態(tài)改變,由于CLM5能募集FcRγ,并且其它的FcRγ相關(guān)受體,如PIR-A和破骨細(xì)胞相關(guān)受體在抗體交聯(lián)活化后也能增強(qiáng)破骨細(xì)胞的形成,因此提示CLM5可能也在破骨細(xì)胞的分化中發(fā)揮了作用。然而CLM5在細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞定位情況如何?在炎性刺激時(shí)其細(xì)胞定位是否改變?其對(duì)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子功能產(chǎn)生有何影響?是否參與了巨噬細(xì)胞的TLR和RLH的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等等,這些問題尚未得到回答,也未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。 通過GenBank數(shù)據(jù)庫找到CLM5的全長mRNA序列(asscession No: AY457051),利用特異性引物,我們從小鼠腹腔巨噬細(xì)胞cDNA中克隆得到含666bp堿基的cDNA,預(yù)測其編碼221氨基酸(a.a)的蛋白質(zhì),預(yù)計(jì)分子量為25kDa。對(duì)其氨基酸序列分析表明,該蛋白含有長17a.a的信號(hào)肽和23a.a的疏水跨膜區(qū),胞外段含有特征性的IgV功能域(domain),屬于Ig超家族成員,該受體胞內(nèi)段很短,提示其可能對(duì)細(xì)胞功能起正向調(diào)控作用。通過搜索NCBI的基因組數(shù)據(jù)庫,將CLM5定位于小鼠11號(hào)染色體的11E2區(qū),染色體定位結(jié)果同CLM3,將CLM5蛋白序列在GenBank/EMBL數(shù)據(jù)庫中作比較,發(fā)現(xiàn)與CLM5同源性較高的均為CLM家族成員,其中與CLM1同源性最高,胞外段IgV區(qū)域一致性為91%;與CLM家族蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比對(duì)分析及進(jìn)化樹分析結(jié)果同CLM3。 RT-PCR分析表明,CLM5廣泛分布于小鼠正常組織,在心、腦、肝、脾及淋巴結(jié)、胎盤、睪丸等組織均有不同程度表達(dá),其中尤以肝臟、脾臟和淋巴結(jié)表達(dá)水平最高,在P815、Crip、RF、CT26、YAC-1、A20、3LL、Hepa、RAW264.7等細(xì)胞株中,CLM5在RAW264.7巨噬細(xì)胞中表達(dá),在新鮮分離的小鼠原代的細(xì)胞中, CLM5在腹腔巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中表達(dá),CLM5的這種在組織的廣泛分布特點(diǎn)提示該分子在天然免疫防御中可能扮演了重要的角色。 那么CLM5的生物學(xué)功能究竟如何?實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),CLM5表達(dá)下調(diào)能抑制TLRs配體誘導(dǎo)的IL6和IFN-β的產(chǎn)生,CLM5 siRNA轉(zhuǎn)染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞48小時(shí),以LPS(0.1μg/ml劑量刺激)、polyI:C(10μg/ml劑量刺激)、CpG ODN(0.3μM劑量刺激)刺激6小時(shí)后,收集上清采用ELISA試劑盒測定IL-6、IFN-β表達(dá),結(jié)果顯示,CLM5表達(dá)被干擾抑制后,LPS、polyI:C、CpG ODN誘導(dǎo)的IL-6、IFN-β產(chǎn)生顯著降低,提示CLM5參與了TLRs觸發(fā)的巨噬細(xì)胞天然免疫應(yīng)答過程及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控。以MOI 10的VSV感染干擾CLM5后的巨噬細(xì)胞,IFN-β產(chǎn)生顯著降低,對(duì)CLM5的功能進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)干擾CLM5后其TCID50顯著增高,提示CLM5參與了RLH觸發(fā)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控。 我們進(jìn)一步探討CLM5對(duì)TLRs觸發(fā)的IFN-β產(chǎn)生影響的作用機(jī)制,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),CLM5促進(jìn)TRIF、MDA5、RIG-I介導(dǎo)的IFNβ轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)。將TRIF(或MDA5、RIG-I)、pCMV-CLM5質(zhì)粒與IFN-β報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,24小時(shí)后檢測IFN-β報(bào)告基因活化情況,結(jié)果顯示,CLM5過表達(dá)增強(qiáng)了TRIF、MDA5、RIG-I誘導(dǎo)的IFN-β轉(zhuǎn)錄增強(qiáng),并且,從結(jié)果中我們可以看出,單獨(dú)轉(zhuǎn)染CLM5與IFN-β報(bào)告基因,CLM5隨轉(zhuǎn)染劑量的增加,能呈遞增趨勢誘導(dǎo)IFN-β活化,提示CLM5能通過TRIF、MDA5、RIG-I途徑促進(jìn)IFN-β活化,其本身也可以通過以上三條途徑以外的其它機(jī)制促進(jìn)IFN-β活化。本實(shí)驗(yàn)提示,CLM5參與了RLH和TLRs的信號(hào)調(diào)控。免疫共沉淀證實(shí),CLM5可以與含有ITAM基序的FcRγ相結(jié)合,FcRγ可能在CLM5對(duì)RLH和TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控中發(fā)揮一定功能。 綜上所述,我們對(duì)CLM家族的CLM5的生物學(xué)特性及功能進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)CLM5主要在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中表達(dá),干擾CLM5表達(dá)之后能夠降低TLRs配體刺激的腹腔巨噬細(xì)胞IFN-βand IL6的分泌,經(jīng)VSV刺激后IFN-β產(chǎn)生也降低。進(jìn)一步研究表明CLM5能增強(qiáng)TRIF、MDA5、RIG-I介導(dǎo)的IFNβ轉(zhuǎn)錄增加,可見CLM5可以促進(jìn)TLR和RLH觸發(fā)的巨噬細(xì)胞的天然免疫應(yīng)答及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
【圖文】：

pcDNA3.1/CLM3-Flag真核表達(dá)載體克隆流程圖

圖 1-2.pGEX-CLM3 原核表達(dá)載體克隆流程圖re 2. Illustration for the construction of pGEX-CLM3 expression vectoern印跡檢測養(yǎng)細(xì)胞，在含 1mM PMSF 的 PBS 中洗兩次，重懸于 T-PER 組織蛋白E）中，混勻，，置冰上 20 分鐘，以 10,000g 4°C 離心 10 分鐘，收集上采用 BCA 法。樣品或免疫沉淀物行SDS-PAGE，隨后以100V恒電壓于4°C 轉(zhuǎn)至硝酸紅染色并標(biāo)記大小和方向。室溫封閉2小時(shí)（含5％脫脂奶粉的TBST稀釋液，室溫孵育1小時(shí)。TBST（含0.05％ Tween 20的TBS溶液）洗
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

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10 馬爾瞻,張效群;兩種甲型肝炎疫苗對(duì)青年人的免疫原性比較[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);2000年04期

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1 楊恒;曹三杰;黃小波;文心田;;豬傳染性胃腸炎病毒DNA疫苗的構(gòu)建與免疫原性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

2 岳紅云;賀翔鴿;;Nogo—66蛋白的免疫原性研究—在體實(shí)驗(yàn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

3 李忠明;張穎;黃嘉璐;何為;劉慶良;張洪勇;熊思東;;采用嵌合基因技術(shù)增強(qiáng)結(jié)核桿菌ESAT-6抗原在小鼠和猴子體內(nèi)免疫原性的研究[A];2005年中國防癆協(xié)會(huì)全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

4 李擎天;朱泳璋;褚嘉yP;張庶民;郭曉奎;;GM-CSF對(duì)重組百日咳DNA疫苗免疫原性的作用[A];首屆全國微生物基因組學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)程與論文摘要集[C];2006年

5 王雪峰;楊彬;王帥;林躍智;呂曉玲;趙立平;王鳳龍;周建華;;EIAV強(qiáng)毒株和弱毒疫苗株gp90基因差異與免疫原性關(guān)系研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

6 徐云升;;高危型HPV新型免疫原MAP的分子設(shè)計(jì)及其免疫原性鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2010年

7 劉一塵;張春杰;程安春;程相朝;汪銘書;李銀聚;吳庭才;易明林;;NDV HN基因的畢赤酵母表達(dá)及免疫原性分析[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

8 閆艷麗;郭宇;張華春;;豬肺炎支原體病原性概述[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 羅賢忠;黃青云;;禽大腸桿菌血清型O_2、O_(78)融合雙價(jià)弱毒菌株免疫原性的研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

10 賈曉暉;程健君;何多姣;李雙霞;田穎新;賈天軍;;感染CPn人群中CPn0308免疫原性分析研究[A];河北省免疫學(xué)會(huì)第六次免疫學(xué)大會(huì)資料匯編[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者楊健;腫瘤細(xì)胞遨游太空后發(fā)生變化[N];人民日?qǐng)?bào);2003年

2 齊繼成編譯;PowderJect的Fluvirin進(jìn)入Ⅰ期臨床[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

3 賢人;唐教授談流感疫苗[N];保健時(shí)報(bào);2003年

4 張路 王立成;我國流感疫苗的研發(fā)史[N];健康報(bào);2003年

5 本報(bào)記者 洪天語;GLP，困于錢財(cái)和人才[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

6 記者 李泳溈;長春百克多個(gè)新藥進(jìn)入臨床研究[N];吉林日?qǐng)?bào);2009年

7 王興波;我國獸用生物制品業(yè)面臨的選擇[N];中國畜牧報(bào);2005年

8 王;乙肝疫苗成本有望減少[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

9 黃敏燕　譯;靜脈用Ferumoxytol可安全有效治療貧血癥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

10 記者 張周來　吳小康;志愿者接種正常[N];新華每日電訊;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 井申榮;微載體制備甲肝滅活疫苗的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

2 陳夏冰;胸膜肺炎放線桿菌保守表面蛋白的鑒定與免疫原性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 蔣爾鵬;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)降低人胚胎心臟垞細(xì)胞免疫原性的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 劉淑杰;大腸桿菌粘附素亞基FaeG在Lactococcus lactis中的表達(dá)及免疫原性研究[D];江南大學(xué);2010年

5 羅源;丙型肝炎病毒高變區(qū)1對(duì)HCV E2蛋白免疫原性抑制作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 沈美龍;基于DNA免疫的乙型肝炎病毒表面抗原大中小蛋白的免疫原性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

7 田美娟;天壇痘病毒載體改造及其對(duì)HIV重組疫苗免疫原性的影響[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2010年

8 張榮光;幽門螺桿菌omp11和lpp20基因的克隆及表達(dá)產(chǎn)物免疫原性和保護(hù)效果研究[D];鄭州大學(xué);2004年

9 王希;新型流感病毒樣顆粒疫苗在老齡小鼠中免疫原性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 李國江;吉林地區(qū)PRRS流行病學(xué)調(diào)查及真核疫苗構(gòu)建與免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王素華;雞E.tenella 5401基因的克隆及免疫原性的研究[D];浙江大學(xué);2004年

2 甘黎明;雞大腸桿菌1型菌毛的抗原性分析及pi/A基因表達(dá)載體構(gòu)建[D];揚(yáng)州大學(xué);2005年

3 唐艷;TRP-2_（180-188）CTL表位之APL的設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 陳金武;聚乙二醇化重組人生長激素的免疫原性、生物活性及藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];安徽大學(xué);2007年

5 趙潔;鴨疫里默氏桿菌自然弱毒株的部分特性研究[D];西南大學(xué);2008年

6 張莉;豬肺炎支原體MY-99株的培養(yǎng)特性、致病性及免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 原野;重組人干擾素-β1b臨床前長期毒性和免疫原性的評(píng)價(jià)和研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

8 孫會(huì)來;人免疫缺陷病毒重組非復(fù)制型痘苗病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2007年

9 張振華;鴨致病性腸炎沙門氏菌外膜蛋白組成及免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 臧大鵬;牛結(jié)核分支桿菌外膜蛋白OMP37、OMP12基因的克隆表達(dá)及免疫活性檢測[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2525247