【摘要】： 脂肪干細(xì)胞不僅具有跟骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似的多向分化潛能,而且具有取材方法簡(jiǎn)便、來(lái)源廣泛、患者創(chuàng)傷小等優(yōu)勢(shì),這都使其成為近年來(lái)干細(xì)胞研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。干細(xì)胞應(yīng)用的一個(gè)重要方向就是脂肪組織工程,由于脂肪干細(xì)胞具有上述優(yōu)點(diǎn),這無(wú)疑令脂肪干細(xì)胞成為構(gòu)建工程脂肪組織的種子細(xì)胞的最佳選擇,如何實(shí)現(xiàn)脂肪干細(xì)胞的成脂分化,是構(gòu)建工程脂肪組織重要的研究課題。 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟趯?duì)通過(guò)共培養(yǎng)人體吸脂來(lái)源的脂肪干細(xì)胞與脂肪細(xì)胞,促使脂肪干細(xì)胞進(jìn)行成脂分化,并通過(guò)各種生物學(xué)檢測(cè)手段,觀察干細(xì)胞經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)后的成脂分化效果。 具體方法是:首先采用膠原酶消化的方法,從吸脂手術(shù)來(lái)源的人體脂肪組織中,分別分離得到人體脂肪干細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。對(duì)分離得到的脂肪細(xì)胞在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察、特異性的油紅O染色并拍照觀察、臺(tái)盼藍(lán)死活染色并拍照觀察、脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)觀察等鑒定檢測(cè)的實(shí)驗(yàn);對(duì)于分離得到的脂肪干細(xì)胞在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察、cck-8法檢測(cè)動(dòng)力學(xué)生長(zhǎng)曲線、對(duì)脂肪干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)后進(jìn)行特異性的油紅O和臺(tái)盼藍(lán)復(fù)合染色實(shí)驗(yàn)、Hoechst熒光染色、流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表面抗原的檢測(cè)。 通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)觀察和檢測(cè),證明本實(shí)驗(yàn)收獲的細(xì)胞確實(shí)為形態(tài)完整,功能健全的脂肪干細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。 接下來(lái)把分離得到的人體吸脂來(lái)源的脂肪干細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分別采用1:5,1:1,2:1和5:1四個(gè)比例,在Transwell中進(jìn)行共培養(yǎng)。采用脂質(zhì)染料油紅O和細(xì)胞核染料臺(tái)盼藍(lán)對(duì)共培養(yǎng)后的脂肪干細(xì)胞進(jìn)行染色,顯微鏡下拍照觀察細(xì)胞形態(tài),并計(jì)算成脂分化率。同時(shí),通過(guò)混合成脂誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞,并以此為成脂分化的陽(yáng)性對(duì)照組,以不加任何誘導(dǎo)劑的普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞為成脂分化的陰性對(duì)照組。結(jié)合共培養(yǎng)對(duì)照組,分析考察了本實(shí)驗(yàn)共培養(yǎng)條件下,各個(gè)不同細(xì)胞比例培養(yǎng)組之間,成脂誘導(dǎo)分化效果的差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:用脂肪干細(xì)胞與脂肪細(xì)胞的共培養(yǎng)這種方式,共培養(yǎng)8天內(nèi)尚不能促使脂肪干細(xì)胞成脂分化。對(duì)于未能實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞成脂分化的原因可能有如下兩點(diǎn):一是共培養(yǎng)時(shí)間過(guò)短所致。第二點(diǎn)原因則可能是單純這種干細(xì)胞與脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)方法并不能實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞向成脂方向的分化。 鑒于以上第一點(diǎn)原因,本人將共培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至20天,并采用流式細(xì)胞儀分析共培養(yǎng)后脂肪干細(xì)胞表面抗原標(biāo)記的表達(dá)。同時(shí),對(duì)共培養(yǎng)后的脂肪干細(xì)胞進(jìn)行了Hoechst和PI的死活熒光檢測(cè)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:經(jīng)過(guò)20天共培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞仍未發(fā)生明顯的成脂分化現(xiàn)象,但其表面抗原CD105的表達(dá)發(fā)生明顯降低,這可能意味著脂肪干細(xì)胞經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)后發(fā)生了一定程度的分化。 本實(shí)驗(yàn)在脂肪干細(xì)胞成脂分化研究領(lǐng)域內(nèi),首次嘗試了以利用脂肪干細(xì)胞與脂肪細(xì)胞二者間接共培養(yǎng)的方式進(jìn)行脂肪干細(xì)胞的成脂誘導(dǎo)分化,并通過(guò)各種生物學(xué)檢測(cè)手段對(duì)成脂分化共培養(yǎng)后的脂肪干細(xì)胞進(jìn)行了分化效果的檢驗(yàn),對(duì)進(jìn)一步研究脂肪干細(xì)胞的成脂誘導(dǎo)方法和機(jī)理具有指導(dǎo)意義。
【圖文】：

圖1.1組織再生_l:程系統(tǒng)示意圖 F191.1TissueRegenerationSystemdiagram圖1.1展示了再生組織工程具體實(shí)現(xiàn)的系統(tǒng)過(guò)程(圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)址為ims.Postech.ac.kr)。首先，模仿人體自然組織的結(jié)構(gòu)，根據(jù)患者自身需要，利用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)出適合的組織工程支架，然后將種子細(xì)胞接種到支架材料上形成人工工程組織構(gòu)建物，，當(dāng)構(gòu)建物體外培養(yǎng)至適宜的大小，滿足植入條件后，便可將構(gòu)建物植入體內(nèi)，

引用中不可回避的難題[79一8’]。3脂肪細(xì)胞脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，由疏松結(jié)締組織分隔成小葉(如圖1.2所示，圖片來(lái)源于生物谷網(wǎng)站，網(wǎng)址為~.bioon.Com)。脂肪組織通常分為兩類:第一類是黃(白)色脂肪組織(在某些哺乳動(dòng)物呈白色)，即通常所說(shuō)的脂肪組織。它由大量單泡脂肪細(xì)胞集聚而成，細(xì)胞中央有一大脂滴，胞質(zhì)呈薄層，位于細(xì)胞周緣，包繞脂滴。黃色脂肪組織主要分布在皮下、網(wǎng)膜和系膜等處，約占成人體重的10%，是體內(nèi)最大的貯能庫(kù)。參與能量代謝，并具有產(chǎn)生熱量、維持體溫、緩沖保護(hù)和支持填充等作用。第二類是棕色脂肪組織呈棕色，其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管，脂肪細(xì)胞內(nèi)散在許多小脂滴
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2522314