【摘要】：p55基因編碼一個(gè)從線蟲(chóng)到人類(lèi)非常保守的蛋白,它與人類(lèi)HSPC117高度同源。HSPC117是一細(xì)胞黏附相關(guān)蛋白,可以結(jié)合紐蛋白(vinculin),vinculin能夠與樁蛋白(paxillin)結(jié)合,以減少paxillin-FAK的相互作用,從而調(diào)控細(xì)胞存活和運(yùn)動(dòng)。但p55、vinculin和paxillin在胰腺發(fā)育中的作用還不清楚。為了探索p55、vinculin和paxillin在小鼠胰腺發(fā)育中的時(shí)空表達(dá)模式,了解p55、vinculin和paxillin在胰腺發(fā)育中的功能,本研究從小鼠胰腺中克隆了vinculin和paxillin基因片段;通過(guò)半定量RT-PCR方法檢測(cè)了p55在小鼠胚胎發(fā)育E12.5、E13.5、E15.5、E17.5和出生后及成體的表達(dá)變化;通過(guò)原位雜交、免疫組化研究了p55、vinculin和paxillin在胚胎期E10.5、E12.5、E13.5、E15.5、E17.5胰腺的時(shí)空表達(dá)譜。 半定量RT-PCR結(jié)果表明,P55 mRNA在E12.5、E13.5、E15.5、E17.5、出生到成體胰腺中均有表達(dá),但整體表達(dá)水平變化不大。通過(guò)整體原位雜交方法沒(méi)有檢測(cè)到E10.5胰芽中p55 mRNA的表達(dá)。通過(guò)原位雜交和免疫組化聯(lián)合染色發(fā)現(xiàn),p55在E12.5和E13.5天胰腺的上皮分支末端細(xì)胞中有較強(qiáng)表達(dá);在E15.5的全部胰腺上皮中均有表達(dá),但單個(gè)細(xì)胞中的p55表達(dá)強(qiáng)度下降;E17.5天胰腺?zèng)]有檢測(cè)到p55的表達(dá);paxillin在胰腺上皮中的表達(dá)模式與p55相似,但paxillin在胰腺間質(zhì)中也維持低水平的表達(dá)。vinculin僅在胰腺上皮中表達(dá),從E12.5到E15.5天的變化幅度不大,到E17.5天表達(dá)下降。 因而,p55在胰腺發(fā)育的第二次轉(zhuǎn)換前后高表達(dá)于胰腺上皮外周分支生長(zhǎng)的末端,paxillin和vinculin在此區(qū)域同樣也有較高水平的表達(dá),暗示它們可能與胰腺發(fā)育過(guò)程中上皮分支生長(zhǎng)時(shí)細(xì)胞的遷移和黏附有關(guān)。
【圖文】：

p砧在早期胰腺發(fā)育中的E15.5、E17.5、出生及成年的小一些差異，這是研究胚胎發(fā)育除這種客觀存在的差異，即同之間的個(gè)體差異，，而每個(gè)時(shí)間通過(guò)以上的處理我們可以認(rèn)為表達(dá)分析且活性穩(wěn)定，因此在提取RN到較高的純度和較好的完整性。15.5，E17.5，出生及成體胰腺，利用其純度和濃度達(dá)，0D2司OL處

M.DL20(舊 Maker1.成體2.出生 3.E17.54.E15.55.E13.56.E12.5將各時(shí)期RNA調(diào)節(jié)成扭卵l后，反轉(zhuǎn)錄PCR，通過(guò)選取E12.5和E17.5兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)胰腺RNA在25循環(huán)、28循環(huán)、35循環(huán)不同循環(huán)參數(shù)的摸索(如圖2一1)，最終確定32為最佳循環(huán)參數(shù)。以持家基因T入IA結(jié)合蛋白(珊瑪為內(nèi)部參照，我們檢測(cè)了p55在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況，夕”擴(kuò)增片段為878bP;TBP擴(kuò)增片段為190bp(如圖2一2)。對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行灰度掃描，并用每個(gè)樣品的p55電泳條帶灰度/TBP電泳條帶的灰度比值作為各個(gè)時(shí)期p”的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，各個(gè)發(fā)育階段均可檢測(cè)到p”基因mRNA的表達(dá);成體的表達(dá)略低于胚胎期，從胚胎早期E12.5至E15.5天表達(dá)略有增加E15.5天后表達(dá)又呈下降趨勢(shì)，但總體上將各個(gè)時(shí)期變化不大(如圖2一3)。........生出名咧側(cè)Z山山貶名日l(shuí)了).刃二口叫成體 e17.5els.5e13.5el2.圖2一胰腺不同時(shí)期尸”基因的表達(dá)2.4.2基因克隆分析以E13.5的RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 榮明,石玉秀;紐蛋白在原代培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元的分布及其與神經(jīng)元形態(tài)的相關(guān)性[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2002年01期

2 劉長(zhǎng)鎖,陳乃宏;樁蛋白的結(jié)構(gòu)與功能[J];生命的化學(xué);2005年03期

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本文編號(hào)：2521025