【摘要】： 目的：初步探討靶向Hes-1 siRNA干擾對Th17細胞分化的影響。方法：分離小鼠淋巴結細胞,Trizol法提取總RNA, RT-PCR技術檢測不同時間Jagged-1蛋白和γ分泌酶抑制劑DAPT (The y-secretase inhibitor N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-phenylg lycinet butyl ester, DAPT)對外周T淋巴細胞Hes-1和Deltex-1 mRNA表達的影響；WesternBlot分析不同時間和不同濃度Hes-1 siRNA干擾對外周T淋巴細胞Hes-1蛋白表達的影響；Elisa檢測靶向Hes-1 siRNA干擾對外周T淋巴細胞IL-17細胞因子分泌的影響；熒光標記單克隆抗體染色技術結合流式細胞儀檢測靶向Hes-1 siRNA干擾后外周CD4+T淋巴細胞及其胞內IL-17和IFN-γ的變化。結果：Jagged-1能促進Hes-1 mRNA的表達,以第3d的作用最為明顯,第5d作用有所減弱；DAPT組Hes-1 mRNA的表達明顯低于空白對照組。Jagged-1組Deltex-1 mRNA表達明顯升高,第2d達到高峰；DAPT作用1d后Deltex-1 mRNA的表達低于空白對照組,第2d開始升高,第3d高于空白對照組。Jagged-1和Hes-1siRNA作用12h,Hes-1蛋白表達無明顯變化；Jagged-1作用24h,Hes-1蛋白表達開始升高,36h達到高峰,持續(xù)至48h，72h后Jagged-1組Hes-1蛋白表達下降。Hes-1 siRNA作用24h后Hes-1蛋白表達下降,在36h降至最低,一直持續(xù)至72h；作用36h,100 nmol／LHes-1 siRNA能明顯降低Hes-1蛋白表達,與200 nmol／L、250 nmol／LHes-1 siRNA組相比無明顯差異。流式分析顯示,Jagged-1組CD4+T淋巴細胞胞內IL-17表達明顯降低,而Hes-1 siRNA則促進外周CD4+T淋巴細胞胞內IL-17表達。結論：Jagged-1能激活Notch信號通路,抑制外周CD4+T淋巴細胞分泌IL-17。靶向Hes-1 siRNA能下調Jagged-1-Notch信號,促進外周CD4+T淋巴細胞向Th17細胞分化。
【圖文】：

圖1Notch信號通路[4]Fig1.Notehsignalpathw盯[4]Notch信號除了依賴csL途徑外，還有不依賴csL的途徑[6J。2002年，Martinez等通較果蠅Su(H)和Notch兩種突變體發(fā)現(xiàn)，Su(H)突變和Notch突變所造成的表型完全一致，表明可能還存在一條不依賴于Su(H)的Notch信號通路，后來用on七nction的方法也證實了這一點。此外還發(fā)現(xiàn)某些可與NlcD結合的蛋白也介導cs賴的信號。CSL的非依賴途徑通常表現(xiàn)為3種情況:(l)僅僅表現(xiàn)在NICD與非CS成員的其它轉錄因子相互作用，例如NICD與Mef或Lef-l的相互作用;(2)表現(xiàn)在ch與細胞內其它蛋白相互作用，，這種作用的結果不是影響基因表達而是直接改變了目白的功能，例如Notch能在細胞質直接改變果蠅轉錄調節(jié)子Musashi的功能;(3)Notch不必釋放NICD就可以行使一些生物功能。

和功能【’“]。調節(jié)性T細胞在預防和抑制自身免疫性疾病、炎癥、變態(tài)反應和移植排斥中有非常重要的作用117]。隨著對自身免疫病研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)很多現(xiàn)象不能用傳統(tǒng)的Thl/Th2模式來解釋，直至發(fā)現(xiàn)了一種新的細胞亞群—Thl7細胞(圖3)。勿一圈口一唇付巡一畫L·粼比，13，黔蘸蒸翼耀二2諭:!L一17............悶卜圖3初始T淋巴細胞分化153] Fig3.InitialTeelldifferentiation[53]Thl7細胞的發(fā)現(xiàn)源于非限制性自身免疫病的研究。一直以來，我們認為Thl的失調會引起炎癥并誘導自身免疫病。過去一直認為的小鼠自身免疫病模型一實驗性自身免疫性腦脊髓炎 (expermientalautoimmuneeneephalomyelitis，EAE)是IL一12誘導的Thl細胞所介導，最近研究發(fā)現(xiàn)，敲除IL一12或IFN一Y基因后，小鼠的自身免疫性炎癥非但沒有減輕反而更加嚴重。在EAE小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可檢測到大量產(chǎn)生IL一17的CD4+T細胞浸潤，將此類細胞過繼轉移給健康小鼠可以誘發(fā)嚴重的EAE
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 王劍博;劉衛(wèi)平;章翔;姬西團;侯俊峰;王鵬;;神經(jīng)干細胞分化過程中bHLH基因表達[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2007年03期

2 李菁菁;馬正海;張富春;;RNA干擾技術治療疾病[J];細胞生物學雜志;2007年05期

3 陳莉;秦婧;朱遠源;;在醫(yī)藥領域中RNA干擾研究進展[J];藥物生物技術;2009年01期

4 于哲;邢飛躍;曾耀英;;Delta 1與Jagged 1在誘導T細胞分化中的不同作用[J];中華微生物學和免疫學雜志;2006年06期

本文編號：2521018