【摘要】： 目的： 針對IL-17對某些細胞因子/趨化性細胞因子及一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表達的調(diào)節(jié),探討IL-17在小鼠沙眼衣原體肺炎菌株(Chlamydia muridarum, Cm)呼吸道感染中的作用及機制。 方法： BALB/c小鼠鼻腔吸入1×103 IFU Cm,建立小鼠Cm呼吸道感染模型。于感染后不同天數(shù)處死小鼠。利用RT-PCR及EL ISA技術(shù)檢測小鼠肺組織IL-17mRNA及蛋白的表達,并利用細胞內(nèi)細胞因子染色技術(shù)檢測小鼠脾臟IL-17+ CD4+T細胞即Th17細胞百分率,確定IL-17及Th17在小鼠衣原體肺感染中的產(chǎn)生及誘導。利用抗鼠IL-17單克隆抗體鼻腔吸入中和Cm感染小鼠內(nèi)源性IL-17,以抗鼠IL-17單克隆抗體獨特型(IgG2a)作為對照。通過檢測小鼠體重變化、肺組織衣原體生長及病理學改變,確定IL-17在衣原體肺感染中的保護作用。對支氣管肺泡灌洗液內(nèi)炎癥細胞進行染色及分類計數(shù),確定IL-17對肺組織浸潤的炎細胞類型的影響。最后,利用RT-PCR檢測IL-17對肺組織及小鼠肺上皮細胞內(nèi)細胞因子/趨化性細胞因子及iNOS表達的影響,探討IL-17在小鼠衣原體肺感染中的保護作用機制。 結(jié)果： Cm呼吸道感染可誘導小鼠肺組織IL-17產(chǎn)生及脾臟Th17細胞擴增。與給予獨特型抗體IgG2a的對照組比較,IL-17中和小鼠顯示嚴重的疾病狀態(tài),主要包括：明顯的體重降低、肺組織衣原體持續(xù)大量生長及更為嚴重的肺組織病理學改變。IL-17中和小鼠支氣管肺泡灌洗液中性粒細胞(PMN)百分率及絕對數(shù)量顯著下降,而淋巴及單核細胞百分率及絕對數(shù)量升高。IL-17中和小鼠肺組織與PMN趨化作用相關的因子,MIP-2及IL-6 mRNA表達顯著下降,而T細胞趨化因子RANTES表達上調(diào)；體外實驗顯示,IL-17可協(xié)同TNF-a顯著上調(diào)小鼠肺上皮細胞(TC-1) MIP-2及IL-6表達,但下調(diào)TNF-a誘導的RANTES表達。此外,IL-17可顯著上調(diào)小鼠肺組織及TC-1細胞iNOS表達,并增強細胞內(nèi)NO產(chǎn)生,參與細胞內(nèi)抗衣原體反應。 結(jié)論： 衣原體呼吸道感染可誘導小鼠體內(nèi)IL-17產(chǎn)生及Th17細胞擴增。IL-17在衣原體呼吸道感染中發(fā)揮重要保護作用。其作用機制包括：IL-17調(diào)節(jié)細胞因子/趨化性細胞因子在小鼠肺組織,尤其是肺上皮細胞內(nèi)的表達,誘導不同類型炎細胞在肺組織浸潤,參與炎性應答的調(diào)節(jié)；其次,IL-17通過增強衣原體感染小鼠肺組織及肺上皮細胞iNOS表達及NO產(chǎn)生,直接參與細胞內(nèi)衣原體抑制。
【圖文】：

將1、IO3lFu的cm鼻腔吸入Balb/c小鼠。在規(guī)定的不同時間點處死小鼠后，利用RT-PCR及EUSA技術(shù)分別檢測小鼠肺組織IL一17的mRNA及蛋白表達。如圖1一1所示，在Cm感染后第2天，即可在小鼠肺組織檢測到IL一 17mRNA的表達，5一7天達高峰，14一21天顯著下降(圖1一1一A)。ELISA結(jié)果顯示，肺組織勻漿中IL一17蛋白在感染后第7天及14天均顯著增高(圖1一1一B)。以上結(jié)果提示，衣原體感染可有效誘導IL一17產(chǎn)生，而其mRNA及蛋白在感染后不同階段肺組織中的表達提示IL一17的固有性及獲得性來源。 1.2.2Cm感染誘導小鼠外周免疫器官IL.1丫CD曠T細胞(Th17細胞)的擴增及IL一17產(chǎn)生取未感染小鼠及感染后第7天小鼠脾及肺縱隔淋巴結(jié)細胞

Day7Day14圖1一 3Cm肺感染后IL一17中和及I如Za對照小鼠體重變化(A)、肺組織衣原體生長(B)、及病理變化(C)Figl一 3Bo勿 weight1055，， CmgrowthandPathologiealehangesinthe lungofIL一17一 eutralizedmieeandIgGZaeontrolmiee.括:(l)與對照組相比，IL一17中和小鼠體重下降更為明顯，并且在感染后第14天體重未見恢復，而IgGZa對照組小鼠體重逐漸恢復至正常水平(圖1一3一A)。(2)IL一17中和小鼠肺內(nèi)衣原體持續(xù)大量生長，在感染后第7及14天肺組織衣原體活性均顯著高于IgGZa對照組。尤其在感染晚期，幾一17中和小鼠肺內(nèi)細菌滴度大約是IgGZa對照組小鼠的2000倍(圖1一3一B)，提示IL一17中和小鼠不能有效清除肺組織感染的衣原體。(3)肺病理學分析顯示
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 ;Interleukin 17-Producing γδ T Cells Increased in Patients with Active Pulmonary Tuberculosis[J];Cellular & Molecular Immunology;2008年03期

本文編號：2520399