【摘要】： 目的: 研究含不同濃度的EGF和bFGF及各組組合濃度復合因子誘導培養(yǎng)液對大鼠BMSCs向成纖維細胞的增殖分化作用。探討生長因子體外誘導BMSCs增殖分化的的最佳種類及濃度,為構建組織工程韌帶提供理想的種子細胞來源。 方法: 1貼壁法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞生長增殖情況,MTT測定骨髓間充質(zhì)干細胞原代及傳代1~8天增殖情況,免疫組化對骨髓間充質(zhì)干細胞進行鑒定。 2含2ng/ml、20ng/ml的bFGF、EGF及組合濃度的復合因子誘導培養(yǎng)液代替正常培養(yǎng)液對第三代骨髓間充質(zhì)干細胞進行誘導分化,MTT檢測不同誘導液誘導后細胞增殖情況,免疫組化對誘導后成纖維細胞進行鑒定。 結(jié)果: 1倒置顯微鏡下觀察,骨髓間充質(zhì)干細胞24h后開始貼壁,形狀由圓形變?yōu)樗笮?細胞核明顯,胞漿比較大;骨髓間充質(zhì)干細胞傳三代后細胞呈梭形,少數(shù)為多角形,細胞融合后細胞呈渦旋或放射狀排列。 2 MTT檢測結(jié)果顯示:骨髓間充質(zhì)干細胞呈“S”形曲線生長。原代細胞第二天進入對數(shù)生長期,傳代細胞第四天進入對數(shù)生長期。 3免疫組化結(jié)果顯示:骨髓間充質(zhì)細胞表面抗原CD34和Laminin表達為陰性,Vimatin和α-SMA為陽性表達;誘導后,細胞Laminin表達轉(zhuǎn)為陽性。 4 MTT(7、14天)和免疫組化結(jié)果表明: ①bFGF或EGF以及復合因子均能誘導骨髓間充質(zhì)干細胞成功分化為成纖維細胞; ②相同濃度的bFGF組和EGF組之間誘導效果比較無顯著性差異; ③低濃度誘導組2ng/mlbFGF組、2ng/ml EGF組、2ng/ml bFGF + 2ng/mlEGF組與對照組相比無顯著性差異; ④高濃度誘導組20ng/ml bFGF組、20ng/ml EGF組、20ng/ml bFGF + 2ng/ml EGF組、2ng/ml bFGF + 20ng/ml EGF和20ng/ml bFGF + 20ng/ml EGF較對照組增殖顯著加快,誘導分化為成纖維細胞的能力最強,但高濃度組之間無顯著性差異。 結(jié)論: 1全骨髓貼壁培養(yǎng)法可成功培養(yǎng)體外骨髓間充質(zhì)干細胞,并獲得理想的細胞純度; 2不同濃度的bFGF或EGF以及復合因子均能誘導骨髓間充質(zhì)干細胞成功分化為成纖維細胞,20ng/ml是促進BMSCs增殖分化較為理想的濃度; 3相同濃度下bFGF和EGF對促進BMSCs分化增殖的作用基本相同; 4聯(lián)合應用bFGF和EGF對BMSCs誘導效果與單獨使用bFGF、EGF無顯著性差異。
【圖文】：

3. BMSCs的免疫組化表型檢測免疫組化染色結(jié)果顯示：① 體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞表面抗原Vimatin、α-SMA表達結(jié)果為陽性。（圖1，圖2）② Laminin（成纖維細胞特異性抗原）和CD34為陰性表達（圖3，圖4），說明未向成纖維細胞和內(nèi)皮細胞分化。圖 1 骨髓間充質(zhì)干細胞對 α-SMA 呈陽性表達（x200） 圖 2 骨髓間充質(zhì)干細胞對 vimatin 呈陽性表達（x400）

免疫組化染色結(jié)果顯示：① 體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞表面抗原Vimatin、α-SMA表達結(jié)果為陽性。（圖1，，圖2）② Laminin（成纖維細胞特異性抗原）和CD34為陰性表達（圖3，圖4），說明未向成纖維細胞和內(nèi)皮細胞分化。圖 1 骨髓間充質(zhì)干細胞對 α-SMA 呈陽性表達（x200） 圖 2 骨髓間充質(zhì)干細胞對 vimatin 呈陽性表達（x400）
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 孫康,王立德,張羽飛;人工合成材料重建膝關節(jié)交叉韌帶的進展[J];骨與關節(jié)損傷雜志;2000年03期

2 孟凡剛,連培文;胚胎干細胞向神經(jīng)細胞分化及其在神經(jīng)科學領域中的應用現(xiàn)狀及前景[J];國外醫(yī)學.神經(jīng)病學神經(jīng)外科學分冊;2004年02期

3 宋丹,方秀斌;表皮生長因子的研究進展[J];解剖科學進展;2002年04期

4 劉曉萍,高英茂,邴魯軍;定向誘導小鼠原始生殖細胞向肝細胞分化的研究[J];解剖學報;2005年06期

5 李佩英,路艷蒙,傅文玉,樸英杰;大鼠骨髓間質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及表型特征[J];解剖學雜志;2002年05期

6 曹誼林;組織工程學的研究進展[J];中國美容醫(yī)學;2005年02期

7 敖英芳,田得祥,崔國慶,胡躍林,史和福,任玉衡;運動員前交叉韌帶損傷的流行病學研究[J];體育科學;2000年04期

8 范宏斌,張春禮,李明全,王臻;前交叉韌帶斷裂后半月板和軟骨損傷的臨床研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2004年02期

9 潘政軍,陳鴻輝,葉春婷,鄒海燕,唐毅,鐘燦燦;聚乙烯醇/膠原共聚物在組織工程前交叉韌帶支架材料中的實驗研究[J];中國矯形外科雜志;2004年05期

10 沈雁,陳鴻輝,李賢讓,唐毅,鐘燦燦,梁佩紅,任國梅,梁偉國;成纖維細胞生長因子和表皮生長因子及復合因子對兔ACL、MCL體外增殖作用[J];中國修復重建外科雜志;2005年03期

本文編號：2517623