【摘要】： 目的: 研究含不同濃度的EGF和bFGF及各組組合濃度復(fù)合因子誘導(dǎo)培養(yǎng)液對(duì)大鼠BMSCs向成纖維細(xì)胞的增殖分化作用。探討生長(zhǎng)因子體外誘導(dǎo)BMSCs增殖分化的的最佳種類及濃度,為構(gòu)建組織工程韌帶提供理想的種子細(xì)胞來(lái)源。 方法: 1貼壁法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況,MTT測(cè)定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代1~8天增殖情況,免疫組化對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 2含2ng/ml、20ng/ml的bFGF、EGF及組合濃度的復(fù)合因子誘導(dǎo)培養(yǎng)液代替正常培養(yǎng)液對(duì)第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,MTT檢測(cè)不同誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖情況,免疫組化對(duì)誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 結(jié)果: 1倒置顯微鏡下觀察,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞24h后開(kāi)始貼壁,形狀由圓形變?yōu)樗笮?細(xì)胞核明顯,胞漿比較大;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳三代后細(xì)胞呈梭形,少數(shù)為多角形,細(xì)胞融合后細(xì)胞呈渦旋或放射狀排列。 2 MTT檢測(cè)結(jié)果顯示:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈“S”形曲線生長(zhǎng)。原代細(xì)胞第二天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,傳代細(xì)胞第四天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。 3免疫組化結(jié)果顯示:骨髓間充質(zhì)細(xì)胞表面抗原CD34和Laminin表達(dá)為陰性,Vimatin和α-SMA為陽(yáng)性表達(dá);誘導(dǎo)后,細(xì)胞Laminin表達(dá)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性。 4 MTT(7、14天)和免疫組化結(jié)果表明: ①bFGF或EGF以及復(fù)合因子均能誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功分化為成纖維細(xì)胞; ②相同濃度的bFGF組和EGF組之間誘導(dǎo)效果比較無(wú)顯著性差異; ③低濃度誘導(dǎo)組2ng/mlbFGF組、2ng/ml EGF組、2ng/ml bFGF + 2ng/mlEGF組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異; ④高濃度誘導(dǎo)組20ng/ml bFGF組、20ng/ml EGF組、20ng/ml bFGF + 2ng/ml EGF組、2ng/ml bFGF + 20ng/ml EGF和20ng/ml bFGF + 20ng/ml EGF較對(duì)照組增殖顯著加快,誘導(dǎo)分化為成纖維細(xì)胞的能力最強(qiáng),但高濃度組之間無(wú)顯著性差異。 結(jié)論: 1全骨髓貼壁培養(yǎng)法可成功培養(yǎng)體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并獲得理想的細(xì)胞純度; 2不同濃度的bFGF或EGF以及復(fù)合因子均能誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功分化為成纖維細(xì)胞,20ng/ml是促進(jìn)BMSCs增殖分化較為理想的濃度; 3相同濃度下bFGF和EGF對(duì)促進(jìn)BMSCs分化增殖的作用基本相同; 4聯(lián)合應(yīng)用bFGF和EGF對(duì)BMSCs誘導(dǎo)效果與單獨(dú)使用bFGF、EGF無(wú)顯著性差異。
【圖文】：

3. BMSCs的免疫組化表型檢測(cè)免疫組化染色結(jié)果顯示：① 體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原Vimatin、α-SMA表達(dá)結(jié)果為陽(yáng)性。（圖1，圖2）② Laminin（成纖維細(xì)胞特異性抗原）和CD34為陰性表達(dá)（圖3，圖4），說(shuō)明未向成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分化。圖 1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì) α-SMA 呈陽(yáng)性表達(dá)（x200） 圖 2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì) vimatin 呈陽(yáng)性表達(dá)（x400）

免疫組化染色結(jié)果顯示：① 體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原Vimatin、α-SMA表達(dá)結(jié)果為陽(yáng)性。（圖1，，圖2）② Laminin（成纖維細(xì)胞特異性抗原）和CD34為陰性表達(dá)（圖3，圖4），說(shuō)明未向成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分化。圖 1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì) α-SMA 呈陽(yáng)性表達(dá)（x200） 圖 2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì) vimatin 呈陽(yáng)性表達(dá)（x400）
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2517623