發(fā)布時間：2019-06-12 16:29

【摘要】： 目的: 1.體外培養(yǎng)擴(kuò)增大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMMSCs)和人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(human placenta mesenchymal stem cells,hPMSCs)。 2.探索rBMMSCs和hPMSCs是否具有向多巴胺能樣細(xì)胞分化的潛能。 方法: 1.rBMMSCs和hPMSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定 1.1.貼壁篩選法分離大鼠骨髓中間充質(zhì)干細(xì)胞;消化、貼壁篩選法分離人胎盤中的間充質(zhì)干細(xì)胞,以DMEM/F12培養(yǎng)基和10%的胎牛血清培養(yǎng)。 1.2.流式細(xì)胞儀檢測hPMSCs表面抗原。 1.3.將rBMMSCs和hPMSCs向脂肪細(xì)胞分化,油紅O染色觀察誘導(dǎo)后的脂滴;將rBMMSCs和hPMSCs向成骨細(xì)胞分化,堿性磷酸酶判斷誘導(dǎo)后的細(xì)胞是否具有成骨細(xì)胞的特征。 2.rBMMSCs和hPMSCs向多巴胺能樣細(xì)胞誘導(dǎo)和鑒定 2.1.rBMMSCs向多巴胺能樣細(xì)胞誘導(dǎo) 應(yīng)用堿性成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、抗壞血酸誘導(dǎo)rBMMSCs向多巴胺能樣細(xì)胞分化。 2.2.hPMSCs向多巴胺能樣細(xì)胞誘導(dǎo) 應(yīng)用方案一(堿性成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、抗壞血酸),方案二(堿性成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、維甲酸、抗壞血酸、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤)和方案三(堿性成纖維細(xì)胞生長因子、β-巰基乙醇、地塞米松、胰島素、神經(jīng)生長因子)誘導(dǎo)hPMSCs向多巴胺能樣細(xì)胞分化。 2.3.RT-PCR檢測rBMMSCs誘導(dǎo)前后神經(jīng)巢蛋白基因、核受體相關(guān)因子-1基因、芳香族氨基酸脫羧酶基因和酪氨酸羥化酶基因的表達(dá);檢測hPMSCs誘導(dǎo)前后神經(jīng)巢蛋白基因和酪氨酸羥化酶基因的表達(dá)。 2.4.免疫熒光染色檢測rBMMSCs和hPMSCs誘導(dǎo)前后神經(jīng)巢蛋白、神經(jīng)核蛋白、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和酪氨酸羥化酶的表達(dá)。 2.5.ELISA法測定rBMMSCs和hPMSCs誘導(dǎo)前后培養(yǎng)上清和胞質(zhì)多巴胺濃度。 結(jié)果: 1.rBMMSCs相關(guān)結(jié)果 (1)rBMMSCs原代培養(yǎng)一般10-14d;rBMMSC向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)4周,細(xì)胞變?yōu)槎噙呅?堿性磷酸酶染色胞質(zhì)被染成棕褐色;rBMMSC向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)2周,細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)脂滴,油紅O染成紅色。(2)誘導(dǎo)向多巴胺能樣細(xì)胞分化:RT-PCR顯示未誘導(dǎo)的rBMMSCs僅表達(dá)β-actin,誘導(dǎo)后3d的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)巢蛋白基因和核受體相關(guān)因子-1基因,誘導(dǎo)2周后的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)巢蛋白基因、核受體相關(guān)因子-1基因、芳香族氨基酸脫羧酶基因和酪氨酸羥化酶基因;細(xì)胞免疫化學(xué)染色顯示,誘導(dǎo)3d后的細(xì)胞胞質(zhì)神經(jīng)巢蛋白陽性,誘導(dǎo)7d后胞質(zhì)酪氨酸羥化酶染色陽性,誘導(dǎo)10d后胞質(zhì)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白染色陽性;誘導(dǎo)后的細(xì)胞培養(yǎng)上清中有多巴胺分泌,誘導(dǎo)后的細(xì)胞裂解后胞質(zhì)中有多巴胺。 2.hPMSCs相關(guān)結(jié)果 (1)hPMSCs原代培養(yǎng)一般21-25d;hPMSCs強(qiáng)表達(dá)CD44和CD29,不表達(dá)CD34、CD45,CD106和HLA-DR;hPMSCs向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)4周,細(xì)胞變?yōu)槎噙呅?堿性磷酸酶染色胞質(zhì)被染成棕褐色;hPMSCs向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)4周,細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)脂滴,油紅O染成紅色。 (2)多巴胺能樣細(xì)胞誘導(dǎo)后:RT-PCR顯示未誘導(dǎo)的hPMSCs弱表達(dá)神經(jīng)巢蛋白基因,誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)巢蛋白基因和酪氨酸羥化酶基因;細(xì)胞免疫化學(xué)染色顯示誘導(dǎo)后5d的細(xì)胞胞質(zhì)神經(jīng)巢蛋白染色陽性,誘導(dǎo)后7d的細(xì)胞胞質(zhì)酪氨酸羥化酶染色陽性,誘導(dǎo)后10d后的細(xì)胞胞質(zhì)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白染色陽性;誘導(dǎo)后的細(xì)胞培養(yǎng)上清中有多巴胺分泌,誘導(dǎo)后的細(xì)胞裂解后胞質(zhì)中有多巴胺。 結(jié)論: 1.人胎盤中MSCs能在體外培養(yǎng)擴(kuò)增,胎盤MSCs表達(dá)CD44和CD29,不表達(dá)CD34、CD45、CD106及HLA-DR。 2.大鼠骨髓及人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在體外具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化的能力。 3.大鼠骨髓及人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在體外能誘導(dǎo)分化為多巴胺能樣細(xì)胞,誘導(dǎo)的多巴胺能樣細(xì)胞可以合成及分泌多巴胺。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉艷霞;IGF-1對胎盤產(chǎn)生前列腺素類化合物的效應(yīng)[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;1994年03期

2 李笑天;胎兒血流速度波形的血液動力學(xué)機(jī)制研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;1996年01期

3 孫愛龍,莊蘇星,彭士明;胎盤中人絨毛膜促性腺激素的提取[J];鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1997年04期

4 Alirahima ,Neville W.Bruce;鼠交配前、后單側(cè)卵巢切除對胎兒及胎盤發(fā)育的影響[J];解剖學(xué)研究;1989年02期

5 姚楠;;胎盤口服液的制備和質(zhì)量控制[J];中成藥;1989年04期

6 郭瑞娣,江夕夫;人胎盤中微量鉛的測定[J];衛(wèi)生研究;1990年05期

7 喻凱,童夙明;鉛對孕鼠腦垂體—卵巢—胎盤軸及人絨毛毒性作用的研究[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);1992年02期

8 曹珍修;產(chǎn)后出血防治進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);1992年01期

9 劉伯寧，陶雯琪，徐元鼎;應(yīng)用圖像分析儀對正常足月胎盤不同層次內(nèi)絨毛的體規(guī)學(xué)研究[J];上海醫(yī)學(xué);1994年01期

10 楊秦榮,張明惠,陳國娣;羊水過多并胎盤畸胎瘤1例[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;1994年11期

相關(guān)會議論文 前10條

1 岳蘭竹;李麗娟;王s，

本文編號：2498147