發(fā)布時(shí)間：2019-06-01 21:15

【摘要】： 目的:獲得高純度人血漿β2糖蛋白I(β2GPI),制備兔抗人β2GPI多克隆抗體,為進(jìn)一步研究β2GPI及其抗體在抗磷脂綜合征(APS)病理機(jī)制中的作用奠定基礎(chǔ)。 方法:1.采用HClO_4沉淀、Heparin Sepharose CL-6B親和層析等方法純化人血漿β2GPI;利用SDS-PAGE電泳、免疫印跡分析提純蛋白的純度;觀察不同溫度、NaCl濃度及防腐劑等條件下的β2GPI穩(wěn)定性。2.以純化的β2GPI作為抗原免疫新西蘭大白兔,獲得抗血清;進(jìn)而利用Protein A及β2GPI親和層析柱純化抗血清中的總IgG及抗β2GPI抗體;采用免疫雙向擴(kuò)散試驗(yàn)(IDD)、ELISA和免疫印跡等方法進(jìn)行抗體驗(yàn)證。3.應(yīng)用人β2GPI及其多克隆抗體共同刺激單核細(xì)胞株THP-1,檢測(cè)其組織因子(TF)活性表達(dá)情況;利用β2GPI親和層析柱,初步分析β2GPI與單核細(xì)胞株THP-1表面膜聯(lián)蛋白A2(Annexin A2)的結(jié)合情況。 結(jié)果:1.本法獲得了高純度目的蛋白β2GPI(＞95%)。β2GPI在低于0.8 mol/L NaCl溶液中室溫及4℃保存易降解變性,但在1.6mol/L NaCl溶液中室溫及4℃保存60天均未見(jiàn)蛋白明顯降解。2.IDD及ELISA鑒定抗血清及總IgG效價(jià)分別達(dá)到1:16和1:100000;免疫印跡顯示純化的總IgG和抗β2GPI抗體與β2GPI蛋白均有特異反應(yīng)條帶;3.β2GPI及其多克隆抗體形成的復(fù)合物能夠刺激單核細(xì)胞株THP-1表達(dá)TF活性;免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明,來(lái)自THP-1細(xì)胞的Annexin A2能夠與β2GPI親和柱結(jié)合。 結(jié)論:1.通過(guò)本研究,簡(jiǎn)單方便地獲得了高純度人血漿β2GPI;在使用和保存β2GPI時(shí)要考慮到其降解的可能性,注意保存條件,必要時(shí)凍干保存。2.通過(guò)免疫動(dòng)物及親和層析方法,成功獲得了兔抗人β2GPI多克隆抗體。3.應(yīng)用制備的β2GPI親和層析柱,證明了β2GPI可以結(jié)合單核細(xì)胞株THP-1表面的Annexin A2;β2GPI與其抗體復(fù)合物能夠刺激THP-1細(xì)胞表達(dá)TF活性,是導(dǎo)致APS高凝狀態(tài)的重要機(jī)理之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王婷;周紅;俞穎;胡紅心;;抗β_2糖蛋白Ⅰ抗體誘導(dǎo)血液?jiǎn)魏思?xì)胞表達(dá)組織因子活性的機(jī)制探討[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

2 黃宏亮;周紅;王婷;石文霞;李娜;王海波;;β_2糖蛋白I純化及其穩(wěn)定性分析[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年04期

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本文編號(hào)：2490591