【摘要】： [目的] 本實(shí)驗(yàn)通過給大鼠喂以偏食和高碘水,建立偏食高碘大鼠模型,綜合運(yùn)用凝血指標(biāo)的測定、血漿中HCY的測定、大鼠下腔靜脈肝段的HE染色及相關(guān)因子免疫組化觀察,觀察不同濃度的高碘對大鼠凝血功能的作用及高碘對大鼠下腔靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)的影響,并探討高碘對大鼠凝血功能和血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用機(jī)制。 【方法】 1.實(shí)驗(yàn)動物與分組：選用斷乳后1個月左右,體重100-120g遠(yuǎn)交封閉群的Wistar大鼠(購自山東大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心,屬SPF/VAF級動物),根據(jù)體重和性別隨機(jī)分為8組,次序?yàn)椋孩僬φ战M：正常飼料+正常水組；②正常飼料+10倍碘組；③正常飼料+50倍碘組；④正常飼料+100倍碘組；⑤偏食對照組：偏食飼料+正常水組。⑥偏食飼料+10倍碘組；⑦偏食飼料+50倍碘組；⑧偏食飼料+100倍碘組,每組8只。 2.記錄大鼠體重?cái)?shù)據(jù)：以上各組動物每周稱量體重,記錄。喂養(yǎng)6個月。 3.各項(xiàng)凝血指標(biāo)測定：用乙醚麻醉后,枸櫞酸鈉抗凝管通過眼球靜脈取血,離心分離血漿后,用CA7000全自動凝血分析儀,測定凝血酶原時間(PT-time)、凝血酶原時間國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(PT-INR)、活化部分凝血酶原時間(APTT-time)、纖維蛋白原時間(Fbg-time)、纖維蛋白原濃度(Fbg-c)、凝血酶時間(TT)抗凝血酶Ⅲ活性(AT3：A)和D-二聚體(D-dimer)。 4.測定各組大鼠血液HCY的含量。 5.大鼠下腔靜脈HE染色：取用10%福爾馬林固定的大鼠下腔靜脈,常規(guī)石蠟包埋,切片,常規(guī)用二甲苯脫蠟,經(jīng)各級乙醇至水,蘇木素染色5min,自來水沖洗。鹽酸乙醇分化30s。自來水浸泡15min。常規(guī)脫水,透明,封片,觀察其內(nèi)皮細(xì)胞的變化。 6.大鼠下腔靜脈免疫組織化學(xué)：組織切片通過脫蠟和水化,抗原修復(fù)后,PBS沖洗,滴加一抗、二抗,進(jìn)行DAB顯色,觀察ET-1、ICAM-1在下腔靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)。 【結(jié)果】 1.大鼠體重的變化 干預(yù)2、4、6個月時,各正常飼料+高碘飲水組的大鼠體重與NI組大鼠相比無明顯差別；偏食對照組(BNI)直到第6個月體重才與NI組顯出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；干預(yù)2、4、6個月時,各偏食飼料+高碘飲水組大鼠體重均明顯低于NI組。 2.大鼠各項(xiàng)凝血指標(biāo) 各正常飼料+高碘飲水組的大鼠與正常對照組相比,10HI組的大鼠的各指標(biāo)PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、APTT、TT和AT3%數(shù)值降低,纖維蛋白原濃度(Fbg-c)數(shù)值升高,差異顯著(PT、PT-INR、Fbg-Time、AT3%:p0.05, TT、APTT、Fbg-c:p0.01);而50HI和100HI組的大鼠PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、TT和APTT數(shù)值升高,纖維蛋白原濃度(Fbg-c)數(shù)值降低(除50HI的Fbg-Time、TT、Fbg-c:p0.05,50HI、100HI兩組的其它指標(biāo)均p0.01)(見表1)。DD各組無明顯差異。各偏食對照組與正常對照組相比,B10HI組的大鼠PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、APTT、TT和AT3%數(shù)值降低,纖維蛋白原濃度(Fbg-c)數(shù)值升高(除APTT p0.01外,其余各項(xiàng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)而BNI、B50HI和B100HI組的大鼠PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、TT和APTT數(shù)值升高,纖維蛋白原濃度(Fbg-c)數(shù)值降低。(除B50HI組的TT無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余的數(shù)值P0.01)。各偏食對照組與各正常飼料+高碘飲水組的大鼠相比,凝血功能降低。 3.高碘組大鼠的內(nèi)皮細(xì)胞功能受到了一定影響,HCY含量發(fā)生了變化：隨著碘濃度的逐漸升高,HCY的含量逐漸升高。與正常對照組(NI)相比,10HI組,50HI組,100HI組,B10HI組,B50HI組,B100HI組的HCY含量升高差異顯著(除了10HI組數(shù)值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余各組p0.01) 4.高碘組內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了變化,隨著碘濃度的逐漸升高,大鼠下腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)增生現(xiàn)象,偏食組比正常飼料組明顯。 5.大鼠下腔靜脈免疫組化結(jié)果顯示,高碘組下腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的ET-1,ICAM-1達(dá)顯著增加,偏食組比正常飼料組明顯。而正常對照組表達(dá)較弱。 【結(jié)論】 1.本研究提示高碘對大鼠凝血功能有促進(jìn)和降低的雙重作用,這種作用與碘的劑量有關(guān)。適量的高碘促進(jìn)凝血功能,但隨著碘濃度的升高表現(xiàn)出降低凝血功能的作用。偏食能降低大鼠凝血功能。 2.形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),高碘可致下腔靜脈內(nèi)皮增生、變厚,同時內(nèi)皮下層細(xì)胞外間質(zhì)增多；ET-1、ICAM-1表達(dá)明顯,和投碘劑量增多有關(guān),偏食組尤為明顯,提示在該動物模型中高碘通過刺激內(nèi)皮細(xì)胞損傷與增殖,在下腔靜脈局部引起纖維組織增生。 3.在該動物模型中高碘可致血漿同型半胱氨酸升高,偏食組尤為明顯,提示在檢測同型半胱氨酸可作為判斷內(nèi)皮損傷的指標(biāo)。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R361.2

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 肖培瑞;生活環(huán)境高碘、飲食習(xí)慣與布—加綜合征發(fā)病關(guān)系探討[D];山東大學(xué);2011年

2 趙莎莎;高碘對體外培養(yǎng)大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞損傷作用的研究[D];山東大學(xué);2012年

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本文編號：2469182