【摘要】： 人體腸道中定植著復(fù)雜的微生物群落。作為人類后天獲得的“第二基因組”,腸道菌群參與宿主的許多基本生理代謝活動(dòng),在宿主的營(yíng)養(yǎng)、免疫、健康和疾病中發(fā)揮了重要作用。柔嫩梭菌類群是人糞便菌群中數(shù)量最占優(yōu)勢(shì)的三大類群之一,其很多成員具有重要的生理功能,如降解膳食纖維產(chǎn)生丁酸鹽,丁酸鹽對(duì)于宿主的能量供應(yīng)及腸上皮細(xì)胞的發(fā)育有重要作用,并在一定程度上抑制結(jié)腸癌的發(fā)生。但是該類群很多成員嚴(yán)格厭氧且難于培養(yǎng),因此,對(duì)該類群的細(xì)菌多樣性進(jìn)行分子分析對(duì)解析腸道菌群的整體組成具有重要意義。 本研究首先建立能快速篩查和比較大規(guī)模人群腸道中柔嫩梭菌類群組成結(jié)構(gòu)的末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(T-RFLP)分析方法,采用該技術(shù)特異性地分析柔嫩梭菌類群的組成,考察該方法的重復(fù)性和靈敏度。用該方法對(duì)15個(gè)志愿者腸道中的柔嫩梭菌類群進(jìn)行分析,并與變性梯度凝膠電泳(DGGE)方法分析的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示,T-RFLP方法重復(fù)性高,最低能檢測(cè)到群落中1%的細(xì)菌,其結(jié)果與DGGE的分析結(jié)果具有較好的一致性。因此,本研究建立的柔嫩梭菌類群特異性的T-RFLP方法能夠?qū)Υ罅磕c道樣品中柔嫩梭菌類群的結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速、有效的篩查和比較。 為了了解不同健康狀態(tài)下中國(guó)人群腸道菌群的結(jié)構(gòu)特征,我們針對(duì)上海市兩個(gè)行政區(qū)的常住居民展開了大規(guī)模的肥胖、糖尿病流行病調(diào)查工作。肥胖是全世界流行的一類代謝性綜合癥,有研究顯示肥胖的發(fā)生、發(fā)展與腸道菌群的結(jié)構(gòu)或功能的變化有著密切的關(guān)系,因此,探索肥胖和腸道菌群的關(guān)系日益成為學(xué)術(shù)界的研究熱點(diǎn)。該人群通過(guò)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共篩選得到單純肥胖病例413人,體重正常的對(duì)照460人,新發(fā)糖尿病147人,采集所有志愿者的血液、尿液、糞便樣品備用。 本研究從上述人群中挑選了53對(duì)肥胖-健康對(duì)照個(gè)體,其年齡、性別、居住地一一匹配,使用新建立的柔嫩梭菌類群特異性的T-RFLP方法篩查其腸道柔嫩梭菌類群的組成。主成分分析(PCA)結(jié)果顯示,柔嫩梭菌的組成具有顯著的個(gè)體差異,而肥胖和健康人群相比,其腸道中柔嫩梭菌類群的組成差異不顯著。摒除性別、年齡等干擾因素后,仍未發(fā)現(xiàn)兩組人群的柔嫩梭菌組成有差異。同時(shí),針對(duì)該人群,也未發(fā)現(xiàn)柔嫩梭菌的組成在不同性別、不同年齡、不同居住地的志愿者中有差異。 最后,使用本實(shí)驗(yàn)室基于T-RFLP開發(fā)的多重限制性片段標(biāo)記(MRT)分析技術(shù)對(duì)上述樣品進(jìn)行分析,同樣未發(fā)現(xiàn)兩組人群腸道柔嫩梭菌類群的組成有明顯的差異,其結(jié)論與T-RFLP的分析結(jié)果一致。由于不同人之間顯著的個(gè)體差異很可能掩蓋了肥胖與腸道菌群的關(guān)系,因此后續(xù)可以增大樣本量,通過(guò)對(duì)更大樣本的研究來(lái)相對(duì)縮小個(gè)體差異對(duì)腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響。也可以嘗試使用基于測(cè)序的技術(shù)(如454測(cè)序技術(shù))來(lái)進(jìn)一步分析,以獲得更加全面豐富的信息。 綜上,本研究建立了快速篩查大規(guī)模人群腸道中柔嫩梭菌類群組成的T-RFLP方法,并用該方法及MRT技術(shù)分析了肥胖-健康對(duì)照人群的腸道菌群結(jié)構(gòu),未找到柔嫩梭菌在兩組人群中的組成差異。該結(jié)論為理解腸道菌群與肥胖的關(guān)系提供了一定的參考價(jià)值。
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【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R378

【引證文獻(xiàn)】

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1 周玉;內(nèi)蒙古高原干涸湖泊濕地甲烷氧化菌群落的T-RFLP分析[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2466037