發(fā)布時間：2019-04-12 14:24

【摘要】： 疫苗接種引起的不良反應(yīng)是疫苗安全性評價中存在的主要問題之一,其中,與免疫毒性相關(guān)的不良反應(yīng)居多,并以Ⅰ型過敏反應(yīng)最為常見和兇險。近年來,國內(nèi)外公布的與疫苗免疫毒性評價相關(guān)的指導(dǎo)原則中多以大鼠和小鼠作為Ⅰ型過敏反應(yīng)的動物模型,對其評價主要以觀察過敏體征為主。此方法主觀性強、難以量化和標(biāo)準(zhǔn)化,缺乏合理有效的評價模型和方法。本研究以Ⅰ型過敏反應(yīng)最敏感的豚鼠為動物模型,通過對其致敏條件進行標(biāo)準(zhǔn)化,初步建立了評價Ⅰ型過敏反應(yīng)的檢測指標(biāo)及方法,客觀、量化的反映了過敏反應(yīng)的發(fā)生情況,并經(jīng)乙肝疫苗和恥垢疫苗對檢測方法的有效性進行驗證。本研究主要包括以下三個部分的實驗內(nèi)容： 1.血清中過敏抗體水平的檢測：對過敏模型豚鼠的免疫方式進行標(biāo)準(zhǔn)化,建立Ⅰ型過敏反應(yīng)豚鼠模型,通過鹽析及親和層析法,初步制備豚鼠血清過敏抗體(IgG和IgE)參考品。連續(xù)被動皮膚過敏試驗(passive cutaneous anaphylaxis, PCA)證實IgG同樣參與了豚鼠過敏反應(yīng),并且較IgE作用可能更為迅速、短暫。ELISA法檢測各疫苗免疫組IgG1水平,結(jié)果各免疫組特異性IgG1水平均較對照組明顯升高,而總IgG1水平僅OVA組較對照組有所升高。 2.過敏性介質(zhì)含量檢測：通過建立支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)、腹腔灌洗液中肥大細胞和外周血中嗜堿性粒細胞(basophil granulocyte, Ba)的收集和分離方法,檢測各樣本中過敏性介質(zhì)如組胺和白三烯C4(leucotrieneC4, LTC4)的含量,結(jié)果僅OVA組過敏介質(zhì)含量較對照組明顯升高。 3.細胞學(xué)檢測及其他檢測方法：瑞姬氏染色顯示OVA組中Ba和嗜酸性粒細胞(eosinophil granulocyte, Eo)均較對照組明顯升高。中性紅細胞染色表明OVA組豚鼠外周血中Ba所占比例較對照組顯著升高。ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)在豚鼠肺、肝和腎組織勻漿中IgE含量較多。免疫組織化學(xué)顯示IgE主要在肺小血管壁和支氣管粘膜上皮細胞漿及脾髓質(zhì)細胞內(nèi)呈陽性表達,而在心、肝、腎組織中無特異表達。 綜上所述,標(biāo)準(zhǔn)化后的Ⅰ型過敏反應(yīng)豚鼠模型在激發(fā)后能出現(xiàn)典型的過敏癥狀及病理改變,用所選取的公認參與Ⅰ型過敏反應(yīng)的細胞和分子作為評價指標(biāo),其水平較對照組均有明顯升高,說明能夠用所建立的指標(biāo)對疫苗Ⅰ型過敏反應(yīng)進行客觀量化和系統(tǒng)的評價。本研究在國內(nèi)首次系統(tǒng)地用量化檢測方法對疫苗可能引起的Ⅰ型過敏反應(yīng)進行評價,并初步制備了檢測用參考品,彌補了Ⅰ型過敏反應(yīng)缺少定量檢測指標(biāo)的空白,為我國疫苗免疫毒理學(xué)評價特別是Ⅰ型過敏反應(yīng)評價平臺的建立奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The adverse reaction caused by vaccination is one of the main problems in the evaluation of vaccine safety, among which, most of the adverse reactions related to immunotoxicity, and type I allergic reaction is the most common and dangerous. In recent years, most of the guidelines related to vaccine immunotoxicity evaluation published at home and abroad include rats and mice as animal models of type I anaphylaxis, and the evaluation mainly focuses on observing the signs of hypersensitivity. This method is subjective, difficult to be quantified and standardized, and lack of reasonable and effective evaluation models and methods. In this study, guinea pigs, the most sensitive guinea pigs with type 鈪，

本文編號：2457096