【摘要】： 隨著免疫學(xué)研究的不斷深入和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展,針對(duì)不同疾病已開(kāi)展了各種新型基因工程疫苗的研制,但這些疫苗普遍存在分子小、免疫原性弱、難以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答等不足,從而需要某種物質(zhì)來(lái)彌補(bǔ)這種不足,免疫佐劑就在這種情況下產(chǎn)生了。傳統(tǒng)佐劑有許多缺陷,如引起局部炎癥反應(yīng)、致癌、不易在體內(nèi)降解等,所以需要研發(fā)新型佐劑來(lái)克服上述缺點(diǎn)。殼聚糖(Chitosan)是甲殼素脫乙酰化的產(chǎn)物,是一種天然的陽(yáng)離子聚合物,無(wú)毒無(wú)害,安全可靠,易生物降解,而且具有延長(zhǎng)抗原釋放從而提高免疫應(yīng)答水平的作用,所以殼聚糖具有開(kāi)發(fā)成為新型佐劑的潛在價(jià)值。由于模式抗原對(duì)于佐劑的評(píng)價(jià)影響很大,所以尋找一種免疫原性強(qiáng)、純度高而且易于獲取的模式抗原就顯得至關(guān)重要。冠狀病毒的核衣殼蛋白具有相對(duì)保守性和強(qiáng)免疫原性,而且不受糖基化和蛋白修飾作用的影響,符合模式抗原的基本要求。本研究首先用大腸桿菌高效表達(dá)了牛冠狀病毒核衣殼蛋白(Bovine coronavirus N protein),繼而用其作為模式抗原對(duì)殼聚糖微球的緩釋作用進(jìn)行免疫學(xué)效果的評(píng)價(jià)。 本實(shí)驗(yàn)采用乳化交聯(lián)法制備殼聚糖微球,其平均粒徑為5μm,電勢(shì)分布在36mV左右,形狀規(guī)則、表面光滑并且分散性良好,不易團(tuán)聚,體系穩(wěn)定。人工合成的牛冠狀病毒DB2毒株N蛋白基因的3′端(487-1287nt)用大腸桿菌實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物占菌體總蛋白的50.5%。用切割目的蛋白條帶進(jìn)行電洗脫的提純方法,獲得大量高純度的BCV N蛋白,蛋白濃度達(dá)到14.77mg/ml。采用吸附法將殼聚糖微球用BCV N蛋白進(jìn)行包埋,載藥量和包封率分別達(dá)到16.49%和65.62%。然后將此載BCV N蛋白的殼聚糖微球通過(guò)肌肉途徑注射BALB/c小鼠,同時(shí)設(shè)立法國(guó)佐劑ISA 206 VG對(duì)照組、唯N蛋白對(duì)照組和空殼聚糖微球?qū)φ战M。免疫動(dòng)物用間接ELISA方法檢測(cè)血清中的抗體水平及其動(dòng)態(tài),由此評(píng)價(jià)殼聚糖微球?qū)CV N的緩釋作用和佐劑效應(yīng)。 結(jié)果表明,吸附BCV N蛋白的殼聚糖微球在體內(nèi)所產(chǎn)生的免疫效果明顯優(yōu)于唯N蛋白對(duì)照組,說(shuō)明載BCV N蛋白的殼聚糖微球在體內(nèi)具有一定的緩釋效果,使N蛋白在體內(nèi)緩慢釋放而長(zhǎng)時(shí)間誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生,該研究結(jié)果為以殼聚糖微球作為疫苗佐劑積累了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但是與法國(guó)佐劑ISA 206 VG組相比,殼聚糖微球的佐劑效應(yīng)還存在一定的差距,這可能與殼聚糖微球的粒徑分布和比表面積的大小有直接的關(guān)系,有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R94;R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 林鑒,葛勝祥,王穎彬,羅文新,吳婷,李少偉,程通,張軍,夏寧邵;SARS冠狀病毒核衣殼(N)蛋白不同區(qū)域的原核表達(dá)[J];病毒學(xué)報(bào);2005年02期

2 張成裕;免疫增強(qiáng)劑在動(dòng)物醫(yī)學(xué)上的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J];福建畜牧獸醫(yī);2004年S1期

3 潘云智,馮開(kāi)才;甲殼素衍生物的應(yīng)用概況及展望[J];廣東化工;2005年10期

4 何萍,呂鳳林,陳月,李元朝,何鳳慈;納米鋁佐劑吸附HBsAg及其免疫學(xué)效應(yīng)的研究[J];高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào);2005年05期

5 車(chē)小瓊;孫慶申;趙凱;;甲殼素和殼聚糖作為天然生物高分子材料的研究進(jìn)展[J];高分子通報(bào);2008年02期

6 王小紅,馬建標(biāo),何炳林;甲殼素、殼聚糖及其衍生物的應(yīng)用[J];功能高分子學(xué)報(bào);1999年02期

7 趙慶美;逯全縣;田勇;;甲殼素、殼聚糖及其衍生物在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用研究近況[J];化工時(shí)刊;2006年05期

8 尹榮蘭;李昌;張乃生;楊正濤;馮曉聲;;新型免疫佐劑的研究進(jìn)展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年03期

9 梁秀麗;方麗云;王東方;貊鵬濤;付云飛;魏戰(zhàn)勇;;豬細(xì)小病毒HN-3株VP2基因克隆與抗原性分析[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年11期

10 陳耀華;人類(lèi)第6生命要素——甲殼質(zhì)(幾丁質(zhì)·幾丁聚糖)科學(xué)(續(xù)一)[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1999年05期

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1 羅華麗;醫(yī)用殼聚糖緩釋材料研究[D];山東大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：2455332