【摘要】：目的利用昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建含截短型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣殼蛋白L1基因的重組桿狀病毒,并在Sf9細(xì)胞中表達(dá)。方法從NCBI中獲得HPV 58 L1基因序列,應(yīng)用Clustal X2軟件進(jìn)行序列比對(duì)后,確定相對(duì)保守的目的基因序列;人工合成HPV 58 L1基因片段,PCR法獲得截短型HPV58 L1-1基因,克隆至p Fast Bac-1載體中,構(gòu)建重組供體質(zhì)粒p FB-HPV 58 L1-1,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌DH10Bac,構(gòu)建重組Bacmid-HPV 58 L1-1,轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞,獲得第1代(P1)重組桿狀病毒BV-HPV 58 L1-1,擴(kuò)增后采用快速滴定法測(cè)定病毒滴度;將重組桿狀病毒感染Sf9細(xì)胞,表達(dá)HPV 58 L1-1蛋白,并進(jìn)行Western blot分析和透射電鏡觀察。結(jié)果Bacmid-HPV 58 L1-1經(jīng)PCR及測(cè)序鑒定構(gòu)建正確;P2重組桿狀病毒的滴度可達(dá)1.0×108 pfu/ml;HPV 58 L1-1在Sf9昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western blot檢測(cè),可見相對(duì)分子質(zhì)量約55 000的特異性反應(yīng)條帶,電鏡觀察可見L1蛋白自組裝形成病毒樣顆粒(virus-like particles,VLPs)。結(jié)論成功在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)了HPV 58 L1-1蛋白,并自組裝為VLPs,為預(yù)防型HPV疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim to construct recombinant baculovirus containing truncated human papillomavirus (human papilloma virus,HPV) type 58 major capsid protein L1 gene using insect baculovirus expression system and express it in Sf9 cells. Methods the sequence of HPV 58 L1 gene was obtained from NCBI. The sequence alignment of HPV 58 L1 gene was carried out by Clustal X2 software, and a relatively conservative target gene sequence was determined. HPV58 L1 gene fragment was synthesized and truncated HPV58 L1 gene was obtained by PCR method, and cloned into p Fast Bac-1 vector to construct recombinant donor plasmid p FB-HPV 58 L1 / 1, which was transformed into E. coli DH10Bac, to construct recombinant Bacmid-HPV 58 L 1 / 1, which was transformed into E. coli DH10Bac, to construct recombinant Bacmid-HPV 58 L 1, which was transformed into E. coli DH10Bac, and cloned into p Fast Bac-1 vector. The first generation (P1) recombinant baculovirus BV-HPV 58 L1 / 1 was obtained by transfection of Sf9 cells. The titer of the recombinant baculovirus was determined by rapid titration after amplification. Sf9 cells were infected with recombinant baculovirus, and HPV 58 L1 / 1 protein was expressed. Western blot analysis and transmission electron microscopy were used to observe the expression of the recombinant baculovirus. Results Bacmid-HPV 58 L1 / 1 was correctly constructed by PCR and sequencing, and the titer of P2 recombinant baculovirus was up to 1.0 脳 108 pfu/ml;. The expression product of HPV 58 L1 / 1 in Sf9 insect cells was detected by Western blot, and the specific reaction band with relative molecular weight of 55 000 was found. The self-assembled L1 protein was observed by electron microscope to form virus-like particles (virus-like particles,VLPs). Conclusion HPV 58 L1 / 1 protein was successfully expressed in insect cells, and the self-assembly of VLPs, laid a foundation for the study of preventive HPV vaccine. [WT5 "HZ] conclusion [WT5" BZ] [WT5 "BZ]
【作者單位】： 長春生物制品研究所有限責(zé)任公司細(xì)胞因子室;吉林大學(xué)第二醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科;
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2453038