【摘要】： 目的: 探索體外腫瘤微環(huán)境中正常大鼠神經(jīng)干細(xì)胞是否可以發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化而具有相關(guān)腫瘤學(xué)特性。 方法: 1.利用共培養(yǎng)池(cell culture transwell inserts)建立兩種細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型。具體分組為:①實(shí)驗(yàn)組:C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞+神經(jīng)干細(xì)胞,②對(duì)照組:星形膠質(zhì)細(xì)胞+神經(jīng)干細(xì)胞,③空白對(duì)照組:無細(xì)胞的培養(yǎng)液+神經(jīng)干細(xì)胞。 2.應(yīng)用相差顯微鏡及電鏡觀察共培養(yǎng)后NSCs的形態(tài)變化。 3.四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法檢測(cè)共培養(yǎng)后NSCs的增殖變化。 4.免疫熒光細(xì)胞染色技術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)后NSCs P53蛋白表達(dá)情況。 5.染色體核型分析檢測(cè)共培養(yǎng)后NSCs的染色體變化。 6.將共培養(yǎng)后NSCs接種于裸鼠顱內(nèi)觀察成瘤情況。 結(jié)果: 1.成功建立兩種細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型。 2.共培養(yǎng)后NSCs形態(tài)變化:①相差顯微鏡下觀察可見:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)7天后NSCs較對(duì)照組細(xì)胞球體積變大、細(xì)胞數(shù)目相對(duì)較多,鏡下可見與對(duì)照組在形態(tài)上有較明顯的差別;②電鏡下觀察可見:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)7天后NSCs細(xì)胞核較大,核質(zhì)比較高,染色質(zhì)疏松,細(xì)胞器也較發(fā)達(dá)(粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體較多)。對(duì)照組NSCs胞漿較多,細(xì)胞器欠發(fā)達(dá)。 3. MTT法檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組中與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的NSCs增殖較對(duì)照組快。 4.實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)7、14天后NSCs細(xì)胞核上未見P53蛋白陽性表達(dá),共培養(yǎng)28天后部分NSCs細(xì)胞核上P53蛋白呈陽性表達(dá);對(duì)照組及空白對(duì)照組共培養(yǎng)7、14、28天后NSCs細(xì)胞核上P53蛋白均未見陽性表達(dá)。 5.實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白對(duì)照組共培養(yǎng)7、14、28天后的NSCs核型分析結(jié)果均為正常。 6.實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白對(duì)照組共培養(yǎng)7、14、28天后的NSCs接種裸鼠顱內(nèi)均未見腫瘤形成。 結(jié)論: 1. C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)體外共培養(yǎng)體系中的大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的增殖有一定促進(jìn)作用。 2.部分大鼠神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞直接誘導(dǎo)后可以表達(dá)P53蛋白,提示腫瘤微環(huán)境可以造成干細(xì)胞基因表達(dá)異常。
[Abstract]:Aim: to explore the malignant transformation of neural stem cells (NSCs) from normal rats in tumor microenvironment in vitro, and to explore the oncology characteristics of normal rat neural stem cells (NSCs). Methods: 1. Co-culture model of two kinds of cells in vitro was established by co-culture cell (cell culture transwell inserts). The specific groups were as follows: 1 experimental group: C6 glioma cell neural stem cells, 2 control group: astrocyte neural stem cells, 3 blank control group: acellular culture medium neural stem cells. 2. The morphological changes of NSCs after co-culture were observed by phase contrast microscope and electron microscope. 3. The proliferation of NSCs after co-culture was detected by (methyl thiazolyl tetrazolium,MTT colorimetry. 4. Immunofluorescence staining technique was used to detect the expression of NSCs p53 protein after co-culture. 5. Chromosome karyotype analysis was used to detect the chromosome changes of co-cultured NSCs. 6. Co-cultured NSCs was inoculated in nude mice to observe the formation of tumor. Results: 1. The co-culture model of two kinds of cells in vitro was established successfully. 2. The morphological changes of NSCs after co-culture: 1 observation under phase contrast microscope: compared with the control group, after 7 days of co-culture in the experimental group, the volume of NSCs became larger than that of the control group, and the number of cells was relatively larger than that of the control group. There were obvious differences in morphology between the two groups under microscope and in the control group. (2) observation under electron microscope: compared with the control group, the nucleus of NSCs was larger, the nucleus was higher, the chromatin was loose, and the organelles were more developed (rough endoplasmic reticulum, mitochondria more) after 7 days of co-culture in the experimental group. In the control group, the cytoplasm of NSCs was more and the organelles were less developed. 3. MTT assay showed that the proliferation of NSCs co-cultured with C6 glioma cells in the experimental group was faster than that in the control group. 4. There was no positive expression of p53 protein in the nucleus of NSCs at 14 days after co-culture in the experimental group, and in some NSCs nuclei after 28 days of co-culture, while in the control group and the blank control group, there was no positive expression of p53 protein in the nucleus of NSCs at 7 and 14 days after co-culture, and there was no positive expression of p53 protein in the nucleus of NSCs after 28 days. 5. Experimental group, control group and blank control group were cultured for 7, 14, and 28 days later, the results of NSCs karyotype analysis were normal. 6. The experimental group, the control group and the blank control group were cultured for 7, 14, and 28 days after NSCs inoculation, no tumor formation was observed in the brain of the nude mice. Conclusions: 1. C6 glioma cells could promote the proliferation of rat neural stem cells in vitro co-culture system. 2. Some rat neural stem cells were directly induced by C6 glioma cells to express p53 protein, suggesting that tumor microenvironment can cause abnormal expression of stem cell gene.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2444534