發(fā)布時(shí)間：2019-03-19 09:11

【摘要】： 鐵作為人體必需的微量元素，廣泛參與體內(nèi)的代謝過程，其含量下降可影響血紅蛋白的合成，，進(jìn)而影響紅細(xì)胞的形成，甚至引起貧血。世界衛(wèi)生組織報(bào)道全世界患貧血人數(shù)高達(dá)20億，引發(fā)貧血的主要原因是鐵攝入不足，但我們的前期研究發(fā)現(xiàn)在膳食鐵供給充足的情況下，心理應(yīng)激可以降低血清鐵濃度并影響紅細(xì)胞生成。而產(chǎn)生這種影響的機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。 肝臟是機(jī)體主要的鐵貯存部位，同時(shí)在鐵穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)中起著中心和樞紐作用，鐵調(diào)素等許多重要的鐵代謝相關(guān)蛋白都是肝臟特異性合成分泌的。鐵缺乏和鐵過量對(duì)機(jī)體都將產(chǎn)生不良影響，因此，機(jī)體需要具有嚴(yán)格的鐵調(diào)控機(jī)制，既可提供足量的鐵來發(fā)揮其生理功能，又可防止因過量而產(chǎn)生鐵毒性，從而維持體內(nèi)和細(xì)胞內(nèi)的鐵平衡。鐵過負(fù)荷可以在組織、細(xì)胞以及細(xì)胞器水平引起脂質(zhì)過氧化，非蛋白結(jié)合鐵能通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，攻擊細(xì)胞膜上的不飽和脂鏈，鐵蛋白中的三價(jià)鐵被還原成為二價(jià)鐵離子引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，在氧自由基的形成中起著重要作用。國內(nèi)外許多臨床研究發(fā)現(xiàn)，某些疾病與肝鐵代謝異常有密切的聯(lián)系，如慢性炎癥性貧血、酒精性肝炎、肝硬化、遺傳性血色素沉著病均發(fā)生了不同程度的肝鐵代謝紊亂。IL-6是炎癥狀態(tài)下通過誘導(dǎo)肝臟分泌鐵調(diào)素增加引起低鐵血癥的必要條件，相反地中海貧血的患者肝臟分泌鐵調(diào)素減少，而在心理應(yīng)激情況下，肝臟鐵代謝在血清鐵下降的同時(shí)發(fā)揮怎樣的作用，肝臟鐵代謝發(fā)生了哪些改變以及發(fā)生這些改變的分子機(jī)制研究未見報(bào)道�，F(xiàn)代社會(huì)生活和學(xué)習(xí)工作的負(fù)擔(dān)常常使人們處于心理應(yīng)激狀態(tài)。通過進(jìn)一步研究闡明心理應(yīng)激對(duì)肝鐵代謝的影響，對(duì)于全面了解貧血產(chǎn)生的原因，完善貧血的預(yù)防和治療措施具有積極的意義。 第一部分：心理應(yīng)激對(duì)肝鐵濃度和氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響 目的：觀察心理應(yīng)激對(duì)肝臟鐵含量和氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。 方法： 心理應(yīng)激模型制作：雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、心理應(yīng)激組和足底電擊組。采用Communication Box System制作心理應(yīng)激大鼠模型，每日一次，持續(xù)時(shí)間每次30min，實(shí)驗(yàn)周期分別為1d，3d、7d和14d。 指標(biāo)測(cè)定：應(yīng)用原子吸收法測(cè)定肝組織鐵濃度；BPS法測(cè)定非蛋白結(jié)合鐵濃度，Perl's法進(jìn)行肝組織鐵染色；應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)鐵蛋白表達(dá)水平。 圖象分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(x±s)表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 12．0，統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析。 結(jié)果： 1．心理應(yīng)激對(duì)肝鐵濃度的影響 與對(duì)照組相比，7d和14d心理應(yīng)激大鼠肝鐵濃度，鐵蛋白表達(dá)和非蛋白結(jié)合鐵濃度均明顯增加(P0．05)；心理應(yīng)激組和足底電擊組相比，沒有顯著性差異(P0．05)。Perl's鐵染色顯示，與對(duì)照組比較，7d和14d心理應(yīng)激組和足底電擊組大鼠肝組織鐵染色明顯增加，鐵沉積主要分布在肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。 2．心理應(yīng)激對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響 與對(duì)照組相比，7天和14天心理應(yīng)激組超氧化物歧化酶活性和丙二醛濃度明顯升高(P0．05)。心理應(yīng)激組和足底電擊組相比，沒有顯著性差異(P0．05)。 第二部分：心理應(yīng)激影響肝鐵代謝的分子機(jī)制 目的：探討心理應(yīng)激影響肝臟鐵獲取和鐵釋放的分子調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法： 指標(biāo)測(cè)定方法：應(yīng)用蛋白免疫印跡法檢測(cè)鐵調(diào)素(hepcidin)、膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FP1)、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TfR2)蛋白表達(dá)；應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1表達(dá)水平。 圖象分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：采用ImageJ圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(x±s)表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 12．0，統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析和Pearson相關(guān)分析。 結(jié)果： 1．心理應(yīng)激對(duì)肝臟鐵代謝相關(guān)蛋白的影響 與對(duì)照組相比，心理應(yīng)激組3d后出現(xiàn)肝臟hepcidin和TFR2蛋白表達(dá)持續(xù)上調(diào)，F(xiàn)P1蛋白表達(dá)持續(xù)下調(diào)(P0．05)。肝臟TfR1蛋白表達(dá)在7d和14d下調(diào)(P0．05)。心理應(yīng)激組和足底電擊組相比，沒有顯著性差異(P0．05)。 2．心理應(yīng)激大鼠肝鐵濃度與hepcidin的關(guān)系 肝臟hepcidin蛋白表達(dá)與肝臟鐵濃度存在正相關(guān)(P0．05)。Hepcidin升高先于肝鐵濃度改變，提示心理應(yīng)激誘導(dǎo)的肝臟hepcidin表達(dá)升高是引起機(jī)體鐵代謝紊亂的重要原因。 第三部分：心理應(yīng)激大鼠hepcidin變化的調(diào)節(jié)因子研究 目的：闡明IL-6-hepc軸在心理應(yīng)激大鼠鐵代謝紊亂中的作用。 方法： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理：雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、心理應(yīng)激生理鹽水組，足底電擊生理鹽水組，心理應(yīng)激IL-6抗體組，足底電擊IL-6抗體組。采用Communication Box System制作心理應(yīng)激大鼠模型，每日一次，持續(xù)時(shí)間每次30min，實(shí)驗(yàn)周期分別為3d、7d。 指標(biāo)測(cè)定方法：應(yīng)用原子吸收法測(cè)定血清鐵和肝組織鐵濃度；應(yīng)用蛋白免疫印跡法檢測(cè)肝鐵調(diào)節(jié)機(jī)制中的重要調(diào)節(jié)蛋白hepcidin、FP1蛋白表達(dá)；應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)IL-6、TNF-α和IL-10表達(dá)水平。 圖象分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：采用ImageJ圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(x±s)表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 12．0，統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析和Pearson相關(guān)分析。 結(jié)果： 1．心理應(yīng)激對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的影響 與對(duì)照組相比，心理應(yīng)激組3d開始出現(xiàn)肝臟IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)持續(xù)升高(P0．05)，IL-10蛋白表達(dá)沒有顯著性差異(P0．05)。大鼠肝臟IL-6與hepcidin蛋白表達(dá)密切相關(guān)(P0．05)。 2．IL-6抗體抑制心理應(yīng)激大鼠IL-6表達(dá)上調(diào) 與生理鹽水組相比，心理應(yīng)激IL-6抗體組大鼠血清IL-6表達(dá)水平明顯降低(P0．05)，與對(duì)照組相比，心理應(yīng)激IL-6抗體組和足底電擊IL-6抗體組大鼠血清IL-6表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異(P0．05)。 3．IL-6抗體對(duì)心理應(yīng)激大鼠鐵分布的影響 與生理鹽水組相比，心理應(yīng)激IL-6抗體組3d和7d血清鐵濃度明顯升高，7d肝鐵濃度明顯降低(P0．05)，與對(duì)照組相比，心理應(yīng)激IL-6抗體組和足底電擊IL-6抗體組3d和7d血清鐵、7d肝鐵濃度沒有顯著性差異(P0．05)。 4．IL-6抗體對(duì)心理應(yīng)激大鼠肝臟鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與生理鹽水組相比，心理應(yīng)激IL-6抗體組大鼠肝臟hepcidin蛋白表達(dá)降低，F(xiàn)P1蛋白表達(dá)升高(P0．05)，與對(duì)照組相比，心理應(yīng)激IL-6抗體組和足底電擊IL-6抗體組大鼠肝臟hepcidin和FP1蛋白表達(dá)沒有顯著性差異(P0．05)。 結(jié)論： 1．心理應(yīng)激可導(dǎo)致肝臟鐵儲(chǔ)存升高和血清鐵下降，肝臟以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式儲(chǔ)存鐵增加；同時(shí)肝臟非蛋白結(jié)合鐵濃度增加，并伴隨脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)；隨著應(yīng)激時(shí)間延長，肝臟鐵儲(chǔ)存持續(xù)升高，血清鐵濃度持續(xù)下降，肝鐵濃度升高可能是血清鐵濃度下降的原因之一。 2．心理應(yīng)激可誘導(dǎo)肝臟轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2表達(dá)上調(diào)，而肝臟轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1蛋白表達(dá)下調(diào)，提示心理應(yīng)激條件下肝臟鐵儲(chǔ)存增加可能是通過轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2攝取的；同時(shí)出現(xiàn)肝臟hepcidin蛋白表達(dá)上調(diào)與FP1表達(dá)下調(diào)，機(jī)體鐵的循環(huán)再利用過程中巨噬細(xì)胞鐵釋放減少。 3．肝臟hepcidin蛋白表達(dá)與肝鐵濃度存在正相關(guān)，hepcidin表達(dá)上調(diào)先于肝鐵濃度升高，提示心理應(yīng)激所導(dǎo)致的肝臟hepcidin表達(dá)升高是引起了鐵代謝的變化的原因；心理應(yīng)激誘導(dǎo)IL-6和hepcidin蛋白表達(dá)持續(xù)上調(diào)，兩者變化的時(shí)間和趨勢(shì)一致，肝臟hepcidin與IL-6蛋白表達(dá)存在正相關(guān)。 4．IL-6抗體使心理應(yīng)激大鼠肝臟和血清鐵分布趨于正常，并抑制應(yīng)激大鼠肝臟hepcidin蛋白表達(dá)升高以及FP1蛋白表達(dá)的降低。IL-6-hepc軸是導(dǎo)致心理應(yīng)激大鼠機(jī)體鐵代謝紊亂的主要通路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R395

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2443390