【摘要】： 目的: 應(yīng)用大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)來源的血管內(nèi)皮細(xì)胞貼附ePTFE血管壁,并加入肝素共同培養(yǎng),觀察其對(duì)細(xì)胞貼附效率的影響,探討提高細(xì)胞貼附ePTFE的方法。 方法: 1.MSCs分離和誘導(dǎo)分化培養(yǎng):在無菌條件下,取SD大鼠長骨骨髓,經(jīng)密度梯度離心法獲取形態(tài)均一的梭形細(xì)胞;加入10ng/ml內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)和2ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibroblast growth facotr,bFGF)共同培養(yǎng)。 2.誘導(dǎo)細(xì)胞的鑒定:取傳代后第二代實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的兩組細(xì)胞,進(jìn)行免疫組織熒光染色,觀察Ⅷ因子相關(guān)抗原(von Willebrand factor,vWF)的表達(dá)情況,及應(yīng)用透射電鏡觀察細(xì)胞分化后細(xì)胞漿W-P小體的超微結(jié)構(gòu)。 3.細(xì)胞貼壁和貼壁率的測定:將誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞分成4組,種植于膨體聚四氟乙烯(ePTFE)人工血管上并分別加入濃度為0、10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml的肝素培養(yǎng),每4h檢測內(nèi)皮細(xì)胞貼附率,繪制細(xì)胞貼壁曲線。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(?)±s表示,采用SPSS13.0軟件方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測。 結(jié)果: 1.經(jīng)密度梯度離心法獲取的MSCs漩渦狀生長,形態(tài)呈梭形;誘導(dǎo)后細(xì)胞的vWF免疫組織熒光染色呈陽性表達(dá),胞漿呈黃綠色,細(xì)胞輪廓清晰;電鏡下可見血管內(nèi)皮細(xì)胞特征性的W-P小體。 2.誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞在ePTFE的貼附率逐漸升高,于20h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到最高,4組貼比率分別是88.34%、96.48%、91.98%、85.69%。 3.肝素能顯著提高血管內(nèi)皮細(xì)胞在ePTFE貼壁率,濃度為20ug/ml肝素的效果最高。 結(jié)論: 1.大鼠MSCs具有向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的能力,能夠?yàn)檠軆?nèi)皮化及組織工程提供理想的種子細(xì)胞。 2.肝素對(duì)MSCs來源的血管內(nèi)皮細(xì)胞有重要的影響,具有能夠有效地提高血管內(nèi)皮化效率的作用,為人工血管的進(jìn)一步發(fā)展提供了新的思路。
[Abstract]:Purpose: The vascular endothelial cells derived from the rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) were applied to the ePTFE blood vessel wall, and the heparin co-cultured to observe the effect of the heparin on the cell attachment efficiency and to explore the improvement of the cell adhesion ePTFE. Method. Methods:1. MSCs were isolated and induced to differentiate and cultured: in the condition of aseptic, the bone marrow of SD rats was taken, and the fusiform cells with uniform morphology were obtained by density gradient centrifugation;10 ng/ ml of endothelial growth factor (VEGF) and 2 ng/ ml of basic fibroblast growth factor (basic fibroblast growth factor) were added. th facotr,b 2. The expression of von Willebrand factor (vWF) and the cell differentiation were observed by transmission electron microscope. 3. The ultrastructure of the W-P body of the pulp.3. The measurement of the adherence and the attachment rate of the cells: the induced vascular endothelial cells were divided into 4 groups, the artificial blood vessels of the expanded polytetrafluoroethylene (ePTFE) were grown and the concentration of 0,10 ug/ ml,20 ug/ ml and 30 ug/ ml of the heparin culture were respectively added, and the endothelial cells were detected every 4 hours. The cell attachment rate and the cell adherence curve were plotted. 4. Statistical analysis: The experimental data is expressed as (?)% s, and the SPSS13.0 software is used for the performance inspection. Inspection and inspection list The results were as follows:1. The proliferation and morphology of the MSCs obtained by density gradient centrifugation were in the form of the shuttle. The fluorescent staining of the vWF-induced cells in the post-induced cells showed a positive expression, and the cytoplasm was in the form of yellow-green and cell-shaped. 2. The adhesion of the induced vascular endothelial cells to ePTFE gradually increased, the highest in the time of 20 h, and the ratio of the 4 groups was 8. 8.34%, 96.48%, 91.98%, 85.69%. The cells are The effect of ePTFE adherence was the highest in 20 ug/ ml of heparin. The ability to differentiate into the vascular endothelial cells can provide the ideal seed cell for the vascular endothelialization and the tissue engineering.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2443080