【摘要】：目的:觀察微小RNA-19a(microRNA-19a,miR-19a)對(duì)肝細(xì)胞LO2脂肪分解代謝的影響,并初步探索可能機(jī)制。方法:在肝細(xì)胞LO2中轉(zhuǎn)染miR-19a模擬物(mimics)或miR-19a抑制物(inhibitor),用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-19a的水平變化,利用生物信息學(xué)網(wǎng)站查找miR-19a的靶點(diǎn),進(jìn)而用雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-19a對(duì)過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)3’UTR活性的影響,通過Western blotting法檢測(cè)PPARα及其下游脂肪分解代謝關(guān)鍵限速酶酰基輔酶A脫氫酶(acyl-coenzyme a dehydrogenase,ACADM)和肉毒堿棕櫚�；D(zhuǎn)移酶1A(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)蛋白水平的變化,通過β-羥丁酸(beta-hydroxybutyric acid,β-OHB)試劑盒檢測(cè)肝細(xì)胞LO2內(nèi)酮體的生成能力。結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-19a mimics可顯著升高LO2細(xì)胞中的miR-19a水平(P0.05),而轉(zhuǎn)染miR-19a inhibitor可明顯抑制LO2細(xì)胞中的miR-19a水平(P0.05);生物信息學(xué)分析提示PPARα可能為miR-19a的潛在靶點(diǎn),雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)了miR-19a mimics可使PPARα的3’UTR活性明顯降低,miR-19a inhibitor可使PPARα的3’UTR活性顯著升高,同時(shí)伴隨PPARα及其下游基因ACADM和CPT1A的蛋白水平變化。此外,miR-19a mimics明顯降低肝細(xì)胞LO2中β-OHB的含量(P0.05),miR-19a inhibitor可明顯上調(diào)肝細(xì)胞LO2中β-OHB的含量(P0.05)。結(jié)論:miR-19a可通過調(diào)控PPARα及其下游關(guān)鍵限速酶的表達(dá),調(diào)節(jié)肝細(xì)胞的脂肪分解代謝能力。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of tiny RNA-19a (microRNA-19a,miR-19a) on lipid catabolism of LO2 in hepatocytes and explore the possible mechanism. Methods: the level of miR-19a was detected by real-time fluorescence quantitative PCR (real-time fluorescence quantitative PCR) after transfection of miR-19a analogue (mimics) or miR-19a inhibitor (inhibitor), in hepatocyte LO2. Bioinformatics website was used to find the target of miR-19a. The effects of miR-19a on the activity of peroxisome proliferator-activated receptor 偽 (peroxisome proliferator-activated receptor 偽, PPAR 偽) 3'UTR were examined by double luciferase reporter gene assay. The changes of protein levels of PPAR 偽 and acyl-coenzyme a dehydrogenase,ACADM and carnitine palmitoyl transferase 1A (carnitine palmitoyltransferase 1A, CPT 1A were detected by Western blotting method. 尾-hydroxybutyric acid (beta-hydroxybutyric acid, 尾-OHB) kit was used to detect the production of ketones in LO2. Results: transfection of miR-19a mimics could significantly increase the level of miR-19a in LO2 cells (P0.05), while transfection of miR-19a inhibitor could significantly inhibit the level of miR-19a in LO2 cells (P0.05). Bioinformatics analysis indicated that PPAR 偽 might be a potential target of miR-19a. Double luciferase reporter gene assay confirmed that miR-19a mimics could significantly decrease 3'UTR activity of PPAR 偽 and miR-19a inhibitor could significantly increase 3'UTR activity of PPAR 偽. At the same time, the protein levels of PPAR 偽 and its downstream genes ACADM and CPT1A were changed. In addition, miR-19a mimics significantly decreased the content of 尾-OHB in hepatocyte LO2 (P0.05), and miR-19a inhibitor significantly up-regulated the content of 尾-OHB in hepatocyte LO2 (P0.05). Conclusion: miR-19a can regulate the lipid catabolism ability of hepatocytes by regulating the expression of PPAR 偽 and its downstream key rate limiting enzymes.
【作者單位】： 咸寧市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科;湖北科技學(xué)院臨床學(xué)院;湖北科技學(xué)院藥學(xué)院;
【分類號(hào)】：R3416

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2435890