發(fā)布時(shí)間：2019-02-15 10:07

【摘要】： 目的自1879年,Ringer在臺(tái)灣從一具葡萄牙水手尸體肺臟內(nèi)首次檢出并殖吸蟲(chóng),至今人類研究已經(jīng)有120多年的歷史。并殖吸蟲(chóng)種類很多,世界各地報(bào)道達(dá)50多種(含種、亞種、變種和同種異名等),廣泛分布于東亞、東南亞、非洲和拉丁美洲等國(guó)家,在我國(guó)并殖吸蟲(chóng)報(bào)道有30種之多(含種、亞種、變種和同種異名等),分布于全國(guó)各地,尤其在江南、西南和東北各省山區(qū)等地。并殖吸蟲(chóng)種類命名存在如同種異名、種名錯(cuò)定等諸多問(wèn)題,主要與60年代以前單一以傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)為依據(jù)和60~80年代并殖吸蟲(chóng)分類研究中的一點(diǎn)浮躁表現(xiàn)有關(guān)。因此澄清并殖吸蟲(chóng)的分類學(xué)地位,不僅對(duì)充實(shí)與修訂并殖吸蟲(chóng)分類學(xué)有理論意義,而且尚可為并殖吸蟲(chóng)的臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)和流行病學(xué)監(jiān)控與制定防治策略提供參考。90年代以來(lái),分子生物學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用于物種的遺傳變異和分類,直接從DNA水平反映基因本身,具有優(yōu)越性。因此,傳統(tǒng)分類學(xué)結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)方法分類是目前被普遍接受的一種分類方式。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和RAPD技術(shù)對(duì)我國(guó)湖北、江西、浙江等地的11株并殖吸蟲(chóng)進(jìn)行研究,以了解其遺傳變異情況,為并殖吸蟲(chóng)分類提供依據(jù),尤其對(duì)湖北省并殖吸蟲(chóng)流行區(qū)劃分提供分子生物學(xué)依據(jù)。此外,探討采用不同蟲(chóng)期標(biāo)本(成蟲(chóng)和囊蚴)及其不同保存方法(10%福爾馬林或-20℃冷藏)對(duì)該研究的影響。 材料與方法收集我國(guó)湖北省咸寧市溫泉區(qū)、江西省武寧縣、浙江省紹興蘭亭鄉(xiāng)、湖北省赤壁市趙李橋鎮(zhèn)、湖北省十堰市區(qū)、湖北省五峰縣、湖北省鶴峰縣五里鎮(zhèn)、湖北省鶴峰縣走馬鎮(zhèn)、湖北省神農(nóng)架林區(qū)3省9地的11株并殖吸蟲(chóng)。其中湖北省咸寧市溫泉區(qū)、江西省武寧縣、浙江省紹興蘭亭鄉(xiāng)和湖北十堰市區(qū)4地的標(biāo)本為成蟲(chóng),依地名分別稱:湖北溫泉、江西武寧、浙江蘭亭、湖北十堰;其余5地標(biāo)本為囊蚴,其中在五峰縣和鶴峰縣走馬鎮(zhèn)的同一淡水蟹發(fā)現(xiàn)有大小兩種囊蚴,依據(jù)大小分別稱五峰(a)、五峰(b)、走馬(a)、走馬(b),余3株依地名分別稱:湖北赤壁、湖北五里、湖北神農(nóng)架。1.外形觀察:肉眼觀察成蟲(chóng)外形,體視顯微鏡觀察囊蚴的形態(tài)并作記錄;2. DNA提取:采取不同方法提取不同標(biāo)本基因組DNA;3.RAPD-PCR技術(shù):分別擴(kuò)增上述并殖吸蟲(chóng)的基因組DNA,根據(jù)擴(kuò)增的結(jié)果,計(jì)算各株并殖吸蟲(chóng)間的遺傳距離和相似系數(shù),并采用SPSS11.0軟件的Between-groups linkage法對(duì)所得二元數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析,繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。 結(jié)果1.外形觀察:成蟲(chóng)湖北十堰株呈長(zhǎng)梭形,湖北溫泉、江西武寧和浙江蘭亭等3株呈橢圓形;囊蚴呈圓形或類圓形,囊壁兩層,排泄囊內(nèi)含黑色顆粒,鑒定為并殖吸蟲(chóng)囊蚴。其中湖北赤壁株內(nèi)壁較厚;五峰(a)、五峰(b)、走馬(a)、走馬(b)和五里等5株內(nèi)壁較薄;湖北神農(nóng)架株,囊蚴形態(tài)因故已有些變形,但可以確定為并殖吸蟲(chóng)囊蚴。2.DNA提取:DNA溶液A260/A280值經(jīng)測(cè)定在1.60～2.00之間,純度符合要求。3.RAPD-PCR:①各株間差異湖北溫泉、江西武寧、浙江蘭亭和湖北赤壁4株遺傳距離在0.1034～0.1930;湖北走馬(a)、湖北走馬(b)、湖北五峰(a)、湖北五峰(b)、湖北十堰和湖北五里等鄂西6株遺傳距離在0.1233～0.3000,其中湖北走馬2株擴(kuò)增帶型具有較大相似性,相似系數(shù)為0.8182,遺傳距離為0.1818,湖北五峰2株擴(kuò)增帶型也具有較大相似性,相似系數(shù)0.8767,遺傳距離僅為0.1233。湖北神農(nóng)架株與各株遺傳距離在0.2329～0.4154,其與湖北溫泉、江西武寧、浙江蘭亭和湖北赤壁4株遺傳距離在0.3333～0.4154,與余6株遺傳距離在0.2329～0.3731。②系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)在SPSS構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中11株并殖吸蟲(chóng)分為3類:江西武寧、浙江蘭亭、湖北溫泉和湖北赤壁等株為一類;湖北走馬(a)、湖北走馬(b)、湖北五峰(a)、湖北五峰(b)、湖北十堰和湖北五里等株為一類;湖北神農(nóng)架株為另一類。4.湖北省主要有兩個(gè)并殖吸蟲(chóng)流行區(qū):以衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)為主的鄂東南區(qū);以斯氏并殖吸蟲(chóng)為主的鄂西區(qū)。 結(jié)論1.根據(jù)RAPD-PCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,3省11株并殖吸蟲(chóng)在基因水平分為3類:①江西武寧、浙江蘭亭、湖北溫泉和湖北赤壁;②湖北走馬(a)、湖北走馬(b)、湖北五峰(a)、湖北五峰(b)、湖北十堰和湖北五里;③湖北神農(nóng)架。2.湖北省存在以衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)為主的鄂東南和以斯氏并殖吸蟲(chóng)為主的鄂西兩個(gè)流行區(qū)。3.采用不同蟲(chóng)期(成蟲(chóng)和囊蚴)標(biāo)本及其不同保存方法(10%福爾馬林或-20℃冷藏)不影響遺傳變異研究的結(jié)果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R383.2

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本文編號(hào)：2423226