【摘要】： 目的:白血病是血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,目前發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。盡管目前臨床上可以通過化療、骨髓移植等手段使部分患者達到完全緩解,但多數(shù)患者終因耐藥、復發(fā)等情況導致治療失敗。因此,需要尋找更好的治療方法,以提高療效,改善患者的預后和生活質(zhì)量。越來越多的研究證據(jù)表明,免疫因素在控制造血系統(tǒng)惡性腫瘤中起重要作用,免疫治療也逐漸成為惡性血液病治療中的熱點。 IL-23(interleukin-23, IL-23)是2000年發(fā)現(xiàn)的一種細胞因子,屬于IL-12家族,主要由活化的樹突狀細胞(dendritic cell, DC)和巨噬細胞(Macrophage, Mφ)產(chǎn)生,能促進記憶T細胞的增殖、誘導T細胞和自然殺傷細胞(natural killer cell, NK cell)產(chǎn)生干擾素-γ(interferon-γ, IFN-γ),在機體的免疫防御、腫瘤免疫及某些自身免疫性疾病中起著重要作用。IL-2是由T細胞產(chǎn)生的一種自分泌生長因子,能刺激細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic Tlymphocyte, CTL)的增殖與分化,增強NK細胞的細胞毒活性。現(xiàn)已證實,IL-2在體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用,但該作用依賴于外源性大劑量IL-2的持續(xù)輸注且常伴有嚴重的毒副作用。為減輕毒副作用,近年來相繼有不少關(guān)于小劑量IL-2與其他細胞因子聯(lián)合對T細胞體外增殖及功能影響的報道,且多呈協(xié)同增強效應(yīng)。 IL-23能促進T細胞產(chǎn)生IFN-γ,而且因其誘導產(chǎn)生的IFN-γ較少而不會在臨床應(yīng)用時產(chǎn)生嚴重的毒副反應(yīng),因此有可能成為腫瘤治療中一種更為安全的選擇。目前國內(nèi)外尚無有關(guān)IL-23與IL-2聯(lián)合對白血病細胞影響的報道,本課題擬通過上述兩種細胞因子在不同濃度單獨或聯(lián)合應(yīng)用對人外周血單個核細胞增殖及抗白血病活性影響的研究,希望為白血病的免疫治療提供新的線索,以進一步提高臨床惡性血液病的治療效果。 方法:用Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC),以含不同濃度IL-23單獨或聯(lián)合IL-2的培養(yǎng)液培養(yǎng)后,用MTT比色法測定PBMC的增殖情況及PBMC對白血病K562細胞株的殺傷活性,采用流式細胞術(shù)分析誘導前后PBMC的細胞表型變化。所得結(jié)果運用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包處理,以α=0.05為顯著性檢驗水準。 結(jié)果:1. IL-23單獨或聯(lián)合IL-2對PBMC增殖的影響:IL-23各濃度組2、10、50 ng/mL,及IL-23(ng/mL)+IL-2(IU/mL)組2 +10、10+10、50+10、2+100、10+100、50+100,作用于PBMC 1d后測吸光度A值分別為0.536±0.047、0.628±0.018、0.660±0.036、0.643±0.030、0.710±0.031、0.768±0.022、0.732±0.020、0.798±0.047、0.864±0.053;3d后測A值分別為0.580±0.014、0.654±0.037、0.706±0.014、0.690±0.014、0.741±0.014、0.808±0.021、0.791±0.008、0.831±0.023、0.886±0.030;5d后A值分別為0.642±0.009、0.727±0.025、0.796±0.008、0.788±0.013、0.841±0.009、0.893±0.023、0.897±0.023、0.958±0.012、1.077±0.151。統(tǒng)計學分析顯示,細胞因子各濃度組分別培養(yǎng)PBMC1d、3d、5d后均能增強PBMC的增殖作用,各個時間點相比較,差異有顯著性(P0.05);各濃度組間比較,單獨應(yīng)用IL-23各濃度組2、10、50 ng/mL之間增殖作用有顯著性差異(P0.05);相同濃度的IL-23(分別為2、10、50 ng/mL)單獨應(yīng)用與分別聯(lián)合不同濃度IL-2(分別為10 IU/mL、100 IU/mL)組之間相比增殖作用有顯著性差異(P0.05),即IL-23濃度相同時,在一定范圍內(nèi),隨IL-2濃度的增加增殖作用也顯著性增加。同樣,當IL-2濃度相同時,聯(lián)合不同濃度IL-23,隨IL-23濃度的增加,各組間增殖作用也有顯著性差異(P0.05),即IL-23對PBMC的增殖有促進作用,與IL-2聯(lián)合可以增強這種促進作用,在一定濃度范圍內(nèi),隨著作用濃度增加和作用時間延長,IL-23聯(lián)合IL-2對PBMC有明顯的促進增殖作用。 2. IL-23單獨或聯(lián)合IL-2作用后的PBMC對白血病K562細胞株殺傷活性的影響:取各濃度組IL-23(2、10、50 ng/mL)及IL-23 (ng/mL)+IL-2 (IU/mL)組(2 +10、10+10、50+10、2+100、10+100、50+100)處理1d后的PBMC,作用于K562細胞,檢測其殺傷率分別為:(8.6±0.42) %、(11.8±0.59) %、(15.2±0.57)%、(10.9±1.50) %、(13.0±0.91) %、(17.9±0.65) %、(16.4±1.07) %、(20.2±1.19)%、(23.5±0.77) %;細胞因子處理3d后的PBMC對K562細胞的殺傷率分別為:(18.7±1.40) %、(23.1±0.25) %、(25.4±0.56) %、(21.4±1.06) %、(24.3±0.47) %、(30.7±0.51) %、(26.4±0.59) %、(32.0±0.98) %、(39.9±1.59)%;細胞因子處理5d后的PBMC對K562細胞的殺傷率分別為:(26.2±0.37) %、(30.1±0.68) %、(32.9±0.54)%、(29.9±0.73)%、(34.5±0.64)%、(38.4±1.83) %、(35.9±1.13) %、(43.4±3.92) %、(52.2±3.38) %;統(tǒng)計學分析顯示,細胞因子各濃度組作用后的PBMC分別作用K562細胞1d、3d、5d后殺傷率明顯增加,各個時間點間比較,差異有顯著性(P0.05);各濃度組間比較,單獨應(yīng)用IL-23各濃度組2、10、50 ng/mL作用后的PBMC殺傷活性有顯著性差異(P0.05);相同濃度的IL-23單獨作用與聯(lián)合不同濃度IL-2作用后的PBMC相比較,隨IL-2濃度的增加,殺傷活性有顯著性差異(P0.05);相同濃度的IL-2聯(lián)合不同濃度的IL-23作用于PBMC,隨IL-23濃度的增加,PBMC的殺傷活性也有顯著性差異(P0.05)。IL-23能促進PBMC對K562細胞的殺傷活性,IL-23與IL-2聯(lián)合具有協(xié)同作用,可以增強殺傷活性。在一定濃度和時間范圍內(nèi),增加IL-2作用濃度和作用時間,可以進一步增強PBMC的殺傷活性。 3. IL-23單獨或聯(lián)合IL-2誘導前后PBMC的細胞表型的變化:IL-23 50 ng/mL與IL-23+IL-2(50ng/mL+100 IU/mL)組作用于PBMC 5d后,流式細胞術(shù)檢測其細胞表型分別為,CD3+細胞為(80.7±4.37)%和(83.2±4.04)%,CD16+CD56+細胞為(8.4±0.28)%和(12.7±0.9)%,CD4+細胞為(45.2±1.4)%和(47.0±1.72)%,CD8+細胞為(34.5±2.53)%和(35.4±2.11)%;CD4+/CD8+比值分別為1.31和1.33,對照組為1.27。經(jīng)單因素方差分析,以上兩組與對照組相比對PBMC細胞表型的增加有顯著性差異(P0.05);兩組間在CD16+CD56+細胞的表達上有顯著性差異(P0.05);兩組間對CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞的表達以及CD4+/CD8+比值的變化均無顯著性差異(P0.05)。IL-23+IL-2(50+100)組可以更強的促進CD16+CD56+細胞的表達。 結(jié)論:1. IL-23能促進PBMC的增殖,聯(lián)合IL-2后可以進一步促進PBMC的增殖,二者對PBMC的增殖有協(xié)同作用,并呈時間和濃度依賴性。 2. IL-23能促進PBMC對K562細胞的殺傷活性,IL-23與IL-2聯(lián)合可以增強PBMC的殺傷活性,并呈時間和濃度依賴性。 3. IL-23單獨或聯(lián)合IL-2誘導后PBMC中CD3、CD16/56、CD4、CD8抗原的表達均增加,CD4+/CD8+比值不變,二者聯(lián)合后可以進一步增加CD16/56抗原的表達。推測其抗白血病活性與誘導T細胞和NK細胞的增殖分化有關(guān)。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 譚廣;王忠裕;王曉剛;程雷;殷朔;;IL-23基因修飾的樹突細胞疫苗聯(lián)合β-欖香烯對小鼠胰腺癌生長的影響[J];癌癥;2006年09期

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本文編號：2417948