【摘要】：分離培養(yǎng)后4～6 h貼壁生長,光鏡下可見其由圓形變?yōu)樗笮�、長桿狀和多角型,邊界逐漸清晰。24 h后可見單個細胞的搏動,搏動頻率在31～86次/min之間,3 d后可見細胞伸出偽足交織成網(wǎng),形成細胞簇。靜態(tài)培養(yǎng)的3～15 d中,接種密度為2×10~5/cm~2和4×10~5/cm~2的細胞活力始終保持平穩(wěn)上升。 2.基底膜拉伸裝置可施加強度0～30%,頻率0～2 Hz的拉伸應(yīng)變。硅膠膜受到0～30%的拉伸應(yīng)變時,載荷-位移曲線重復(fù)性良好;裝置連續(xù)運行1周,活動部位潤滑良好,硅膠膜夾持部位無松動和滑動現(xiàn)象,電機溫升小,控制系統(tǒng)未出現(xiàn)過熱、紊亂、程序跑飛和暫停現(xiàn)象,數(shù)碼管顯示正常;細胞培養(yǎng)2周內(nèi)生長狀態(tài)良好,無污染。 3.頻率1 Hz,刺激4 d過程中,4%和8%應(yīng)變組的LDH含量和PI染色陽性率無明顯變化,葡萄糖比消耗速率(Q_(Glu)),乳酸比生成速率(Q_(Lac))和聚合態(tài)微管蛋白(β-tubulin)含量均高于對照組,其中8%應(yīng)變組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05),鏡下觀察細胞胞體變長,由原來的多角形趨向于桿狀,邊界清晰,大部分胞體形成與拉伸方向近似45°角或垂直于受力方向的排列。12%應(yīng)變組的LDH含量和PI染色陽性率明顯升高,Q_(Glu)和Q_(Lac)下降(P＜0.01),β-tubulin含量雖高于對照組,但已低于8%應(yīng)變組,鏡下觀察發(fā)現(xiàn)部分胞體崩解,細胞搏動減慢或停止。 應(yīng)變強度8%,刺激4 d過程中,0.5～1.5 Hz組的LDH含量和PI染色陽性率無明顯變化,Q_(Glu),Q_(Lac)和β-tubulin含量均高于對照組,1 Hz組的升高最明顯。2 Hz組的LDH含量和PI染色陽性率升高明顯,Q_(Glu),Q_(Lac)和β-tubulin含量均下降。 4.自行研制的電場發(fā)生器可施加方波、正弦波、三角波、脈沖波四種波形。其中脈沖波形輸出頻率范圍為0.1 Hz～1 KHz,脈沖作用時間調(diào)節(jié)范圍為10 us～10ms。輸出波形峰峰值從0.1～25 V可調(diào)。連續(xù)運行1周后,電極及導線無銹斑和腐蝕現(xiàn)象,控制系統(tǒng)未出現(xiàn)過熱、紊亂、程序跑飛和暫�，F(xiàn)象,數(shù)碼管顯示正常:心肌細胞在該裝置中連續(xù)培養(yǎng)2周,細胞完全融合生長,同時沒有被污染。 5.電脈沖頻率1 Hz,場強2.5～7.5 V/cm組的細胞搏動頻率、Q_(Glu)和Q_(Lac)較對照組高,但均無統(tǒng)計學差異,7.5 V/cm組心肌細胞β-tubulin含量較對照組升高最明顯。10 V/cm組的PI染色陽性率和培養(yǎng)液中LDH含量有大幅度的上升,Q_(Glu)和Q_(Lac)略低于對照組,鏡下觀察細胞內(nèi)產(chǎn)生空泡,部分細胞停跳。 場強7.5 V/cm,0.5～3.0 Hz組的LDH含量和PI染色陽性率無明顯變化,細胞搏動頻率較對照組高,Q_(Glu)和Q_(Lac)無明顯升高,β-tubulin含量較對照組升高,其中7.5 V/cm組升高最明顯。3.5 Hz時,細胞漿內(nèi)易產(chǎn)生空泡,PI染色陽性率和LDH的含量明顯升高,證明已對部分細胞造成損傷。 研究結(jié)論: 1.原代培養(yǎng)的心肌細胞活力較高,搏動良好,2×10~5/cm~2和4×10~5/cm~2的接種密度有利于長時間保持細胞活力的穩(wěn)定。 2.基底膜拉伸裝置和電場發(fā)生器性能穩(wěn)定,可控性好,無菌環(huán)境良好,滿足細胞體外力、電加載實驗需要。 3.拉伸應(yīng)變可對心肌細胞的形態(tài)和排列方式產(chǎn)生影響,適宜的拉伸應(yīng)變可促進心肌細胞的葡萄糖、乳酸代謝以及細胞內(nèi)微管聚合,是心肌細胞收縮增強的佐證。8%,1 Hz的應(yīng)變作用最明顯。 4.1 Hz,5～7.5 V/cm或7.5 V/cm,1～3 Hz的電刺激可使細胞搏動頻率升高,聚合態(tài)微管蛋白含量增加,葡萄糖、乳酸代謝率也有升高趨勢,可能有利于心肌細胞的體外培養(yǎng);電刺激強度過高(1 Hz,10 V/cm或7.5 V/cm,3.5 Hz)可對細胞造成損傷,表現(xiàn)為胞漿內(nèi)空泡增多,細胞停跳,LDH含量和PI染色陽性率升高。
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【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R329

【參考文獻】

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本文編號：2409786