【摘要】： 目的通過對酵母狀態(tài)和芽管狀態(tài)的白念珠菌ALS基因mRNA表達水平的比較,以及對浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)的白念珠菌ALS基因mRNA表達水平的比較,探討白念珠菌ALS基因mRNA在白念珠菌芽管及生物膜形成中可能發(fā)揮的作用,為防治白念珠菌感染提供重要的理論依據(jù)。 方法選取4株標準株白念珠菌和11株臨床株白念珠菌進行實驗研究。白念珠菌酵母狀態(tài)的培育和芽管狀態(tài)的誘導以及浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)白念珠菌的制備:GSB培養(yǎng)基,25℃振蕩培養(yǎng)48h,收獲酵母狀態(tài)的白念珠菌;ph7.0的RPMI-1640液體培養(yǎng)基,37℃振蕩培養(yǎng)3h,收獲芽管狀態(tài)的白念珠菌;體外在6孔細胞培養(yǎng)板上,RPMI-1640液體培養(yǎng)基,37℃靜置培養(yǎng)48h,收獲生物膜狀態(tài)的白念珠菌。熱酸性酚法抽取不同生長狀態(tài)白念珠菌的總RNA,RNA的純度經(jīng)紫外分光光度計A260/A280比值估計,RT-PCR兩步法逆轉(zhuǎn)錄ALS2基因mRNA、ALS3基因mRNA以及ACT1基因mRNA,cDNA擴增,擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳,凝膠成像系統(tǒng)拍照。利用Quantity One電泳分析軟件對ALS2基因和ALS3基因的cDNA擴增條帶進行分析,應用SPSS11.5醫(yī)學統(tǒng)計軟件包的計數(shù)資料配對樣本差值均數(shù)的t檢驗對實驗數(shù)據(jù)進行分析(以P＜0.05為顯著性標準)。 結果標準株白念珠菌芽管狀態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.005,P＜0.01)和ALS3基因mRNA(P=0.0022,P＜0.01)相對表達水平均明顯高于酵母狀態(tài),臨床株白念珠菌芽管狀態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.000,P＜0.01)和ALS3基因mRNA(P=0.000,P＜0.01)相對表達水平均明顯高于酵母狀態(tài),其中標準株和臨床株白念珠菌中多數(shù)菌株未檢測ALS3基因mRNA的表達,個別菌株酵母狀態(tài)ALS3基因mRNA僅檢測到低水平的表達,;標準株白念珠菌生物膜狀態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.0276.P＜0.05)和ALS3基因mRNA(P=0.0405,P＜0.05)相對表達水平均明顯高于浮游狀態(tài);臨床株白念珠菌生物膜狀態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.0004,P＜0.01)和ALS3基因mRNA(P=0.0005,P＜0.01)相對表達水平均明顯高于浮游狀態(tài)。 結論ALS2基因mRNA表達和ALS3基因mRNA表達可能在白念珠菌叢酵母相向菌絲相的轉(zhuǎn)換過程中起重要作用。ALS2基因mRNA和ALS3基因mRNA的表達在體外白念珠菌生物膜形成中可能起著一定作用。
[Abstract]:Objective to compare the expression level of ALS gene mRNA in Candida albicans and Candida albicans ALS gene mRNA in zooplankton state and biofilm state. To explore the role of Candida albicans ALS gene mRNA in the formation of Candida albicans bud tube and biofilm, and to provide an important theoretical basis for the prevention and treatment of Candida albicans infection. Methods four standard strains of Candida albicans and 11 clinical strains of Candida albicans were studied. Cultivation of Candida albicans and induction of budding tube status and preparation of Candida albicans in planktonic and biofilm states: GSB medium, shaking culture at 25 鈩，

本文編號：2401737