【摘要】：育齡期女性的子宮內(nèi)膜正常情況下在月經(jīng)周期隨雌激素、孕激素的影響呈現(xiàn)增殖期、分泌期交替的現(xiàn)象。但是由于先天因素、病理因素或人工因素對子宮內(nèi)膜的破壞和損傷,造成部分育齡期女性的子宮內(nèi)膜始終過薄,稱之為薄型子宮內(nèi)膜,影響胚胎著床,在輔助生殖技術(shù)中尤其常見。 目前,改善薄型子宮內(nèi)膜的方法有多種：藥物治療、手術(shù)治療、干細胞移植等。其中藥物治療較為常用,且效果得到了大家的肯定,手術(shù)治療也在一定程度上可以解決部分患者的薄型子宮內(nèi)膜的問題,但干細胞移植目前尚處于研究階段,未應用于臨床。研究顯示成體干細胞可在體外培養(yǎng)條件下向子宮內(nèi)膜細胞誘導分化,也有學者將成體干細胞移植入薄型子宮內(nèi)膜鼠模型體內(nèi),觀察到了子宮內(nèi)膜的改善。本實驗依托鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心這一平臺,有獲取胚胎干細胞的便利條件,通過摸索胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜細胞誘導分化條件,為治療薄型子宮內(nèi)膜打下實驗基礎。 目的 摸索人胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜樣細胞誘導分化條件,比較不同誘導方案的優(yōu)劣。 方法 1.采用不同的手術(shù)方式獲取子宮內(nèi)膜,分別經(jīng)過分離、培養(yǎng)、純化、鑒定,將獲得的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞凍存?zhèn)溆谩７治鲎訉m內(nèi)膜組織來源是否影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的獲取。 2.本實驗室已成功建系并經(jīng)過鑒定的人胚胎干細胞體外培養(yǎng)、傳代擴增,供誘導分化用。 3.按照誘導分化條件的不同,將實驗對象分為3組：自發(fā)分化組、單純誘導分化組、共培養(yǎng)分化組。誘導分化分為2個階段。 4.分析誘導分化終末階段3組細胞角蛋白、波形蛋白表達情況(免疫熒光法),采用RT-PCR法驗證誘導分化終末階段細胞的基因表達。 結(jié)果 1.子宮內(nèi)膜診刮來源的子宮內(nèi)膜組織來獲得較多量的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞。 2.誘導分化過程中,克隆形態(tài)隨誘導分化的時間發(fā)生改變。 3.誘導分化終末階段,免疫熒光鑒定顯示：共培養(yǎng)誘導分化組、單純誘導分化組角蛋白表達陽性,波形蛋白表達陰性；自發(fā)分化組角蛋白及波形蛋白表達均陽性。對3組角蛋白表達的平均免疫熒光強度進行分析,3組間平均免疫熒光強度差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),再進行兩兩比較,共培養(yǎng)分化組與單純誘導分化組、自發(fā)分化組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),單純誘導分化組與自發(fā)分化組差異無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示角蛋白基因表達陽性,Hoxa10及雌激素受體(estrogen receptor,ER)基因未見明顯條帶。 結(jié)論 1.子宮內(nèi)膜組織量影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的獲得。 2.人胚胎干細胞在誘導分化條件下可以向子宮內(nèi)膜樣細胞分化,在自發(fā)分化條件下同時向間質(zhì)細胞和上皮細胞分化。 3.17-p雌二醇、TGF-α、EGF、PDGF-BB等化學試劑及細胞因子可以誘導人胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜樣細胞分化。共培養(yǎng)條件下,人胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜樣細胞分化的效果較單純誘導條件下進一步提高。
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【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R321

【參考文獻】

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本文編號：2394884