【摘要】： Ⅱ型單純皰疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)感染可造成一種常見而古老的性傳播疾病——生殖器皰疹,其發(fā)病率在性病中僅次于淋病和梅毒。在HSV-2的11種糖蛋白中g(shù)D能誘導(dǎo)產(chǎn)生相對較高的中和抗體水平,gB可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體并能引起細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng),因此成為亞單位疫苗的首選。 糖蛋白B (glycoprotein B,gB)作為單純皰疹病毒兩個(gè)血清亞型的共有外膜蛋白,在維持病毒形態(tài)及病毒進(jìn)入縮主細(xì)胞起著非常重要的作用。人及動(dòng)物接種gB可誘發(fā)高水平的中和抗體并可以引起保護(hù)性T細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此,選取HSV-2 gB全基因序列利用生物學(xué)軟件對B及HLA-A*0201限制性T細(xì)胞表位進(jìn)行了預(yù)測,所篩選的B細(xì)胞中和表位能在小鼠體內(nèi)誘發(fā)高水平的抗體,并且以介導(dǎo)Th2型免疫反應(yīng)的IgG1亞型為主。同時(shí),這兩個(gè)B細(xì)胞中和表位誘發(fā)的抗體能特異性中和病毒(感染)。另外,利用免疫學(xué)方法檢測從gB上篩選的T細(xì)胞表位是否能夠刺激T2細(xì)胞表面穩(wěn)定地產(chǎn)生HLA-A*0201復(fù)合物;篩選的T細(xì)胞表位在體內(nèi)/外是否能夠刺激產(chǎn)生有效的IFN-γ及有效的CD8+T細(xì)胞的殺傷作用。結(jié)果顯示,預(yù)測的T細(xì)胞表位可以刺激T2細(xì)胞穩(wěn)定產(chǎn)生HLA-A*0201復(fù)合物,并可以刺激T細(xì)胞分泌IFN-γ與CD8+T細(xì)胞毒作用。 以HSV-2 333株的基因組DNA為模板擴(kuò)增編碼HSV-2糖蛋白D(glycoprotein D,gD)基因,與載體pFastBacⅠ連接,轉(zhuǎn)化E.coil DH5α感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)PCR及測序鑒定正確。將pFastBacⅠ-gD重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)座至DH10Bac獲得重組穿梭質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞,獲得重組桿狀病毒。重組桿狀病毒感染Sf9細(xì)胞表達(dá)重組蛋白,經(jīng)對表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,SDS-PAGE和Western blot鑒定,成功表達(dá)了HSV-2 gD蛋白。為下一步的工作奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Herpes simplex virus type 鈪，

本文編號：2393481