【摘要】：目的:探討糖皮質激素對關節(jié)軟骨細胞衰老和自噬影響,并分析自噬在其中的作用及機制。方法:培養(yǎng)SD大鼠軟骨細胞,阿利辛染色和collagen II免疫組化進行鑒定。使用不同濃度的地塞米松作用于軟骨細胞不同的時間后,Lyso Tracker Red和MDC染色觀察自噬囊泡的生成,Western blot檢測LC3、beclin-1、P62、p70S6K和4EBP1蛋白表達的變化。β-半乳糖苷酶染色分析糖皮質激素對軟骨細胞衰老的影響,并使用自噬抑制劑來探討自噬對地塞米松作用下軟骨細胞衰老的作用。結果:地塞米松可以顯著提高軟骨細胞的自噬水平,尤其是在作用4 d后,LC3-II表達隨著地塞米松濃度的增加而升高,而P62和beclin-1的表達也驗證自噬水平的升高。Lyso Tracker Red和MDC染色發(fā)現(xiàn)軟骨細胞中自噬泡的生成隨著地塞米松濃度的升高而增加。m TOR信號通路上的p70S6K和4EBP1的磷酸化均被地塞米松抑制。更重要的是,地塞米松可以引起軟骨細胞的衰老,而使用3-MA抑制自噬后,細胞進一步衰老。結論:糖皮質激素激活軟骨細胞中的自噬,并同時誘導軟骨細胞的衰老,而自噬在這過程中對細胞的衰老可能具有代償性的保護作用。同時糖皮質激素抑制m TOR信號通路,可能與自噬的激活相關。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of glucocorticoid on the aging and autophagy of articular chondrocytes, and to analyze the role and mechanism of autophagy. Methods: chondrocytes of SD rats were cultured and identified by alisin staining and collagen II immunohistochemistry. , Lyso Tracker Red and MDC staining of chondrocytes treated with dexamethasone at different concentrations for the detection of LC3,beclin-1,P62, by, Western blot The effect of glucocorticoid on chondrocyte senescence was analyzed by 尾 -galactosidase staining, and the effect of autophagy on chondrocyte senescence induced by dexamethasone was studied with autophagy inhibitor. Results: dexamethasone significantly increased the level of autophagy of chondrocytes, especially after 4 days of exposure, the expression of LC3-II increased with the increase of dexamethasone concentration. The expression of P62 and beclin-1 also confirmed the increase of autophagy level. Lyso Tracker Red and MDC staining showed that the formation of autophagy in chondrocytes increased the phosphorylation of p70S6K and 4EBP1 in. M TOR signaling pathway with the increase of dexamethasone concentration. All were inhibited by dexamethasone. More importantly, dexamethasone can cause chondrocyte senescence, while 3-MA inhibits autophagy and further senescence. Conclusion: glucocorticoid activates autophagy in chondrocytes and induces the aging of chondrocytes. Autophagy may play a compensatory role in protecting chondrocytes from aging. Meanwhile, glucocorticoid inhibits m TOR signaling pathway, which may be related to autophagy activation.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院關節(jié)外科;溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院手術室;
【基金】：溫州市科技局項目(No.Y20140582)
【分類號】：R363

【參考文獻】

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本文編號：2391151