【摘要】： 蚊可傳播多種疾病。蚊媒防制是蚊媒病防治的主要策略。化學(xué)防制是蚊媒防制的主要方法,然而殺蟲劑的大量持續(xù)使用導(dǎo)致了蚊抗藥性的發(fā)生和發(fā)展�？顾幮砸殉蔀槲妹讲》乐蔚淖畲笳系K�？顾幮詸z測(cè)是蚊媒抗藥性治理的前提。從蚊擊倒抗性相關(guān)基因中尋找適用于現(xiàn)場(chǎng)抗藥性檢測(cè)的分子靶標(biāo)是當(dāng)前蚊媒防制研究的重點(diǎn)。 本研究以淡色庫(kù)蚊6個(gè)自然種群為研究對(duì)象,采用PCR擴(kuò)增、基因序列分析等方法,以個(gè)體大樣本、從種群水平研究抗藥性的策略,分析擊倒抗性相關(guān)鈉離子通道基因型(kdr基因型)與擬除蟲菊酯抗性表型、kdr等位基因頻率與種群抗藥性水平的關(guān)系,并初步探討殺蟲劑選擇壓力下kdr基因的進(jìn)化,以期為建立蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)方法奠定基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下: 1.淡色庫(kù)蚊南京敏感種群中,kdr基因存在3種基因型:L1014/L1014、L1014/L1014F和L1014F/ L1014F,包含1種突變L1014F(TTT);唐口抗性種群中,kdr基因存在6種基因型:L1014/L1014、L1014/L1014F、L1014F/ L1014F、L1014/L1014S、L1014S/L1014S和L1014F/L1014S,包含2種突變L1014F(TTT)和L1014S(TCA)。 唐口抗性種群kdr基因突變型L1014F/L1014F純合子為55.6%(55/99),顯著高于南京敏感種群的20.2%(20/103)(p0.001);南京敏感種群野生型L1014/L1014純合子比例為38.8%(40/103),顯著高于唐口抗性種群的9.1%(9/99)(p0.001)。 南京和唐口2個(gè)種群生物測(cè)定后分別分為敏感組(死亡組)和抗性組(存活組),經(jīng)各組kdr基因型分析發(fā)現(xiàn),2個(gè)種群敏感組的野生型L1014/L1014純合子比例:南京46.9%(38/81)、唐口20.0%(4/20),均顯著高于抗性組:南京12.5%(2/16)、唐口6.3%(5/79)(p0.001);2個(gè)種群抗性組的kdr基因突變型L1014F/L1014F純合子比例:南京72.7%(16/22)、唐口65.8%(52/79),均顯著高于敏感組:南京4.9%(4/81)、唐口15.0%(3/20)(p0.001)。 結(jié)果表明,南京和唐口2個(gè)種群的kdr基因L1014F突變與擬除蟲菊酯抗性表型密切相關(guān),提示kdr基因L1014F突變可能可作為蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的分子靶標(biāo)。 2.無(wú)錫、微山、淮北和青島4個(gè)種群生物測(cè)定后分別分為敏感組(死亡組)和抗性組(存活組),經(jīng)各組kdr基因型分析發(fā)現(xiàn),4個(gè)種群敏感組的野生型L1014/L1014純合子比例:無(wú)錫51.5%(33/64)、微山51.9%(28/54)、淮北59.5(25/42)、青島60.0%(21/35),均顯著高于抗性組:無(wú)錫9.1%(3/33)、微山17.9%(7/39)、淮北14.8%(8/54)、青島8.7%(6/69)(p0.001);4個(gè)種群抗性組的kdr基因突變型L1014F/L1014F純合子比例:無(wú)錫72.4%(50/69)、微山68.5%(37/54)、淮北48.7%(19/39)、青島60.6%(20/33),均顯著高于敏感組:無(wú)錫11.4%(4/35)、微山11.9%(5/42)、淮北9.3%(4/54)、青島7.8%(5/64)(p0.001)。 本結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了南京和唐口種群的研究結(jié)果,即kdr基因L1014F突變與擬除蟲菊酯抗性表型密切相關(guān),該kdr基因突變可以作為蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的分子靶標(biāo)。 南京等6個(gè)種群敏感組和抗性組,kdr基因L1014S突變均無(wú)顯著性差異(Paired t-test, t=1.65, d.f.= 5, P=0.16)。 3.經(jīng)WHO成蚊接觸筒生物測(cè)定,南京、無(wú)錫、微山、淮北、青島、唐口6個(gè)種群的存活率分別為21.4%、34.1%、41.9%、56.6%、66.3%、79.8%;6個(gè)種群的kdr基因L1014F等位基因頻率分別為40.3%、38.1%、38.7%、51.0%、60.1%、71.7%。使用回歸分析發(fā)現(xiàn),淡色庫(kù)蚊6個(gè)自然種群的kdr基因L1014F等位基因頻率與抗藥性水平具有正相關(guān)性,相關(guān)性方程為y=1.4681x-23.365,相關(guān)系數(shù)r2 = 0.870, p0.0001。提示kdr基因L1014F等位基因頻率可望用于蚊自然種群擬除蟲菊酯抗性的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),值得進(jìn)一步研究。 南京等6個(gè)種群的抗藥性表型與kdr基因L1014S等位基因頻率無(wú)相關(guān)性(r2 = 0.110, p0.05)。 4.使用溴氰菊酯對(duì)淡色庫(kù)蚊唐口自然種群進(jìn)行逐代篩選,在實(shí)驗(yàn)室建立了低抗性、高抗性品系。 5.在實(shí)驗(yàn)室溴氰菊酯逐代篩選實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)逐代kdr基因型檢測(cè),發(fā)現(xiàn)L1014F突變頻率隨著溴氰菊酯篩選呈規(guī)律性增加,兩者具有顯著相關(guān)性(p0.001);而L1014S突變頻率與溴氰菊酯篩選未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)性。提示在溴氰菊酯抗性的發(fā)生、發(fā)展中,L1014F突變可能具有關(guān)鍵性作用;而L1014S突變可能與之不相關(guān)或不直接相關(guān),有待進(jìn)一步研究。 6.建立了可用于蚊抗藥性現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的2種分子生物學(xué)方法:等位基因特異性PCR(AS-PCR)方法和實(shí)時(shí)TaqMan探針方法。與AS-PCR方法相比,TaqMan探針方法在檢測(cè)kdr基因型時(shí)具有更高的擴(kuò)增效率,更好的敏感性和特異性,值得現(xiàn)場(chǎng)推廣使用。 本研究結(jié)果為建立蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)方法奠定了基礎(chǔ),并為進(jìn)一步闡明抗藥性的分子機(jī)理和制定蚊媒綜合防制策略提供了科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R384

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2390535