【摘要】： 蚊可傳播多種疾病。蚊媒防制是蚊媒病防治的主要策略�；瘜W(xué)防制是蚊媒防制的主要方法,然而殺蟲劑的大量持續(xù)使用導(dǎo)致了蚊抗藥性的發(fā)生和發(fā)展�？顾幮砸殉蔀槲妹讲》乐蔚淖畲笳系K�？顾幮詸z測是蚊媒抗藥性治理的前提。從蚊擊倒抗性相關(guān)基因中尋找適用于現(xiàn)場抗藥性檢測的分子靶標是當前蚊媒防制研究的重點。 本研究以淡色庫蚊6個自然種群為研究對象,采用PCR擴增、基因序列分析等方法,以個體大樣本、從種群水平研究抗藥性的策略,分析擊倒抗性相關(guān)鈉離子通道基因型(kdr基因型)與擬除蟲菊酯抗性表型、kdr等位基因頻率與種群抗藥性水平的關(guān)系,并初步探討殺蟲劑選擇壓力下kdr基因的進化,以期為建立蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場檢測和監(jiān)測方法奠定基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下: 1.淡色庫蚊南京敏感種群中,kdr基因存在3種基因型:L1014/L1014、L1014/L1014F和L1014F/ L1014F,包含1種突變L1014F(TTT);唐口抗性種群中,kdr基因存在6種基因型:L1014/L1014、L1014/L1014F、L1014F/ L1014F、L1014/L1014S、L1014S/L1014S和L1014F/L1014S,包含2種突變L1014F(TTT)和L1014S(TCA)。 唐口抗性種群kdr基因突變型L1014F/L1014F純合子為55.6%(55/99),顯著高于南京敏感種群的20.2%(20/103)(p0.001);南京敏感種群野生型L1014/L1014純合子比例為38.8%(40/103),顯著高于唐口抗性種群的9.1%(9/99)(p0.001)。 南京和唐口2個種群生物測定后分別分為敏感組(死亡組)和抗性組(存活組),經(jīng)各組kdr基因型分析發(fā)現(xiàn),2個種群敏感組的野生型L1014/L1014純合子比例:南京46.9%(38/81)、唐口20.0%(4/20),均顯著高于抗性組:南京12.5%(2/16)、唐口6.3%(5/79)(p0.001);2個種群抗性組的kdr基因突變型L1014F/L1014F純合子比例:南京72.7%(16/22)、唐口65.8%(52/79),均顯著高于敏感組:南京4.9%(4/81)、唐口15.0%(3/20)(p0.001)。 結(jié)果表明,南京和唐口2個種群的kdr基因L1014F突變與擬除蟲菊酯抗性表型密切相關(guān),提示kdr基因L1014F突變可能可作為蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場檢測的分子靶標。 2.無錫、微山、淮北和青島4個種群生物測定后分別分為敏感組(死亡組)和抗性組(存活組),經(jīng)各組kdr基因型分析發(fā)現(xiàn),4個種群敏感組的野生型L1014/L1014純合子比例:無錫51.5%(33/64)、微山51.9%(28/54)、淮北59.5(25/42)、青島60.0%(21/35),均顯著高于抗性組:無錫9.1%(3/33)、微山17.9%(7/39)、淮北14.8%(8/54)、青島8.7%(6/69)(p0.001);4個種群抗性組的kdr基因突變型L1014F/L1014F純合子比例:無錫72.4%(50/69)、微山68.5%(37/54)、淮北48.7%(19/39)、青島60.6%(20/33),均顯著高于敏感組:無錫11.4%(4/35)、微山11.9%(5/42)、淮北9.3%(4/54)、青島7.8%(5/64)(p0.001)。 本結(jié)果進一步驗證了南京和唐口種群的研究結(jié)果,即kdr基因L1014F突變與擬除蟲菊酯抗性表型密切相關(guān),該kdr基因突變可以作為蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場檢測的分子靶標。 南京等6個種群敏感組和抗性組,kdr基因L1014S突變均無顯著性差異(Paired t-test, t=1.65, d.f.= 5, P=0.16)。 3.經(jīng)WHO成蚊接觸筒生物測定,南京、無錫、微山、淮北、青島、唐口6個種群的存活率分別為21.4%、34.1%、41.9%、56.6%、66.3%、79.8%;6個種群的kdr基因L1014F等位基因頻率分別為40.3%、38.1%、38.7%、51.0%、60.1%、71.7%。使用回歸分析發(fā)現(xiàn),淡色庫蚊6個自然種群的kdr基因L1014F等位基因頻率與抗藥性水平具有正相關(guān)性,相關(guān)性方程為y=1.4681x-23.365,相關(guān)系數(shù)r2 = 0.870, p0.0001。提示kdr基因L1014F等位基因頻率可望用于蚊自然種群擬除蟲菊酯抗性的動態(tài)監(jiān)測,值得進一步研究。 南京等6個種群的抗藥性表型與kdr基因L1014S等位基因頻率無相關(guān)性(r2 = 0.110, p0.05)。 4.使用溴氰菊酯對淡色庫蚊唐口自然種群進行逐代篩選,在實驗室建立了低抗性、高抗性品系。 5.在實驗室溴氰菊酯逐代篩選實驗中,通過逐代kdr基因型檢測,發(fā)現(xiàn)L1014F突變頻率隨著溴氰菊酯篩選呈規(guī)律性增加,兩者具有顯著相關(guān)性(p0.001);而L1014S突變頻率與溴氰菊酯篩選未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)性。提示在溴氰菊酯抗性的發(fā)生、發(fā)展中,L1014F突變可能具有關(guān)鍵性作用;而L1014S突變可能與之不相關(guān)或不直接相關(guān),有待進一步研究。 6.建立了可用于蚊抗藥性現(xiàn)場檢測和監(jiān)測的2種分子生物學(xué)方法:等位基因特異性PCR(AS-PCR)方法和實時TaqMan探針方法。與AS-PCR方法相比,TaqMan探針方法在檢測kdr基因型時具有更高的擴增效率,更好的敏感性和特異性,值得現(xiàn)場推廣使用。 本研究結(jié)果為建立蚊擬除蟲菊酯抗性現(xiàn)場檢測和監(jiān)測方法奠定了基礎(chǔ),并為進一步闡明抗藥性的分子機理和制定蚊媒綜合防制策略提供了科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R384

【參考文獻】

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1 宋鋒林,趙彤言,董言德,曹曉梅,張曉龍;淡色庫蚊(Culexpipienspallens)與擊倒抗性(kdr)相關(guān)的鈉通道基因突變[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報;2005年02期

2 翟蕓,周鋼橋,董曉佳,張秀梅,賀鳳英,汪海建,周凱欣,郝冰濤,朱云平,賀福初;大規(guī)模發(fā)掘及分型SNP技術(shù)平臺的建立[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2004年01期

3 劉喃喃;朱芳;徐強;Julia W.PRIDGEON;高希武;;昆蟲抗藥性機理:行為和生理改變及解毒代謝增強(英文)[J];昆蟲學(xué)報;2006年04期

4 劉洪霞;冷培恩;徐仁權(quán);王士珍;;上海地區(qū)流行性乙型腦炎媒介對常用殺蟲劑的抗性研究[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

5 褚宏亮,周明浩,劉大鵬,陳志龍,吳健;江蘇省淡色庫蚊對常用殺蟲劑的抗性研究[J];中華衛(wèi)生殺蟲藥械;2005年03期

6 顧振國;孫伯超;王信宏;朱根忠;;淡色庫蚊對常用殺蟲劑抗性現(xiàn)狀的調(diào)查研究[J];中華衛(wèi)生殺蟲藥械;2007年05期

7 王文志;李書建;劉春龍;張曙光;孟鳳英;;安陽市淡色庫蚊的抗藥性調(diào)查研究[J];中華衛(wèi)生殺蟲藥械;2008年03期

8 章域震;張海林;俞永新;馮云;董關(guān)木;楊衛(wèi)紅;賈麗麗;姚亞夫;;三帶喙庫蚊和致倦庫蚊胸腔接種乙型腦炎病毒減毒活疫苗SA14-14-2株的研究[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;2005年04期

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本文編號：2390535