發(fā)布時(shí)間：2018-12-23 08:31

【摘要】： 目的:研究來源于新鮮和玻璃化凍融復(fù)蘇后的人卵巢組織,在體外培養(yǎng)條件下加入不同濃度的卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)或堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)后雌激素分泌情況、始基卵泡啟動(dòng)及生長(zhǎng)卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育情況。進(jìn)一步探討體外培養(yǎng)條件下FSH與bFGF對(duì)人卵巢組織體外培養(yǎng)的影響,研究人卵巢組織的最佳體外培養(yǎng)條件,為卵巢早衰(POF)或女性惡性腫瘤患者進(jìn)行卵巢移植術(shù)前卵巢培養(yǎng)提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:人卵巢組織體外培養(yǎng)體系基本參照Scott的方案。將12例取自婦科手術(shù)(平均年齡31.33±8.19歲)的新鮮或玻璃化凍融復(fù)蘇后的人卵巢皮質(zhì)切割成約1mm~3大小的組織塊,并隨機(jī)將12塊組織設(shè)為1個(gè)實(shí)驗(yàn)組,根據(jù)在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加FSH的四種不同濃度(0IU/ml,5IU/ml,10IU/ml,15IU/ml)或bFGF的四種不同濃度(0ng/ml,1ng/m,10ng/ml,100ng/ml)隨機(jī)分為16個(gè)組,其中新鮮培養(yǎng)組和凍融培養(yǎng)組各8個(gè)。實(shí)驗(yàn)中采用ECM人工基膜鋪入96孔培養(yǎng)板,a-MEM培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液,并以器官組織培養(yǎng)的方法體外培養(yǎng)14d,每48h更換并收集培養(yǎng)上清以微�；瘜W(xué)免疫發(fā)光法(CIA)進(jìn)行雌二醇(E_2)測(cè)定,于培養(yǎng)后的第14d留取培養(yǎng)后的所有組織粒進(jìn)行HE染色和組織學(xué)觀察,用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.5比較各組卵巢內(nèi)各期卵泡的發(fā)育情況及卵泡構(gòu)成比。 結(jié)果:1、用基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)8d后,新鮮和凍融卵巢組織的E_2水平較培養(yǎng)2d和14d后高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。從組內(nèi)兩兩比較的方差分析(q檢驗(yàn))結(jié)果得出,新鮮與凍融卵巢培養(yǎng)組之間,在E_2水平及各期卵泡構(gòu)成比方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。2、在含F(xiàn)SH的培養(yǎng)液中,加入FSH后,培養(yǎng)2d、8d、14d后的E_2水平隨FSH濃度增加而增加,呈濃度依賴趨勢(shì),尤其是培養(yǎng)14d后與2d間的E_2水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);培養(yǎng)14d后FSH15IU/ml組與對(duì)照組E_2水平有顯著性差異(P＜0.05),但與FSH10IU/ml組E_2水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);FSH10IU/ml組在初級(jí)卵泡率、次級(jí)卵泡率方面與對(duì)照組和FSH5IU/ml組相比是升高的,始基卵泡率、異常卵泡率方面與對(duì)照組和FSH5IU/ml組組間相比是降低的,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3、在含bFGF的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)8d后的E_2水平高于培養(yǎng)2d和14d后的E_2水平,但無顯著性差異(P＞0.05):相同培養(yǎng)時(shí)間下,bFGF100ng/ml組E_2水平高于對(duì)照組和bFGF1ng/ml組、bFGF 10ng/ml組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);從組內(nèi)兩兩比較分析(q檢驗(yàn))結(jié)果可以得出,bFGF各濃度組在培養(yǎng)14d后的始基卵泡率、初級(jí)卵泡率、次級(jí)卵泡率及異常卵泡率方面與對(duì)照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 4、在培養(yǎng)液中加入FSH或bFGF培養(yǎng)14d后,新鮮與凍融卵巢組織培養(yǎng)對(duì)比發(fā)現(xiàn),兩組在E_2水平和各期卵泡構(gòu)成比方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05) 結(jié)論:1、凍存復(fù)蘇的卵巢組織經(jīng)體外培養(yǎng)后,能夠保持與新鮮卵巢近似的E_2分泌功能和各期卵泡構(gòu)成比,這將有利于凍融卵巢組織移植后的生長(zhǎng)發(fā)育和功能恢復(fù)。2、研究發(fā)現(xiàn)加入FSH(FSH5IU/ml、FSH10IU/ml、FSH15IU/ml)的培養(yǎng)液能夠增加E_2水平,可促進(jìn)生長(zhǎng)卵泡進(jìn)一步的發(fā)育。尤其是加入FSH10IU/ml后延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至14d,可以使生長(zhǎng)期卵泡比例增加,并能進(jìn)一步降低異常卵泡比例。因此,在人卵巢皮質(zhì)塊培養(yǎng)液中加入FSH10IU/ml,并培養(yǎng)14d可以近似作為體外卵巢組織培養(yǎng)方案之一。3、在培養(yǎng)液中加入bFGF10ng/ml和bFGF100ng/ml后,均可以促進(jìn)E_2的分泌。但培養(yǎng)14d后這兩個(gè)bFGF濃度組對(duì)卵巢培養(yǎng)中的生長(zhǎng)期卵泡無明顯影響,也不能明顯降低異常卵泡比例。因此,bFGF對(duì)體外卵巢培養(yǎng)中的早期卵泡作用有待進(jìn)一步研究。4、體外培養(yǎng)條件下卵巢組織的卵泡生長(zhǎng)發(fā)育良好,可能由于是在體外卵巢組織擺脫了體內(nèi)復(fù)雜因素的調(diào)控,解脫了體內(nèi)某些抑制卵泡發(fā)育的因素,使卵泡得以生長(zhǎng)發(fā)育。5、在本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)條件下,FSH是人卵巢組織中早期卵泡存活的重要調(diào)節(jié)因子,而bFGF對(duì)于人卵泡發(fā)育及始基卵泡啟動(dòng)無明顯影響。
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【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329.3

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 趙紅巖;不同添加成分對(duì)凍融后人原始卵泡體外培養(yǎng)的研究[D];鄭州大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：2389700