【摘要】：第一部分PKC-alpha對(duì)TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑下Akt的調(diào)節(jié)作用的研究 Akt,又稱為蛋白激酶B (protein kinase B, PKB),是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,屬于蛋白激酶AGC家族。它含有三個(gè)同源性很高的成員：Aktl/PKBα, Akt2/PKBβ和Akt3/PKBΥ。Akt在從原始的多細(xì)胞動(dòng)物到人類中保守存在,在一系列包括細(xì)胞的存活/調(diào)亡、增殖、分化、糖代謝、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期的進(jìn)程、細(xì)胞遷移等生物學(xué)活動(dòng)中發(fā)揮著非常重要的作用。 自從它作為PI3K (phosphoinositide 3-kinase)下游靶分子的這一重要身份被發(fā)現(xiàn)以來,過去的十幾年里人們對(duì)它進(jìn)行了深入的研究。人們對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的研究最初集中在其在腫瘤的發(fā)生中的作用上,且為數(shù)眾多的可調(diào)節(jié)這一通路上的成員的化學(xué)物質(zhì)已被開發(fā)為抗腫瘤藥物。近年來,人們對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路在免疫學(xué)領(lǐng)域尤其是在T細(xì)胞中的作用有了新的認(rèn)識(shí)。研究發(fā)現(xiàn),PI3K/Akt信號(hào)通路可被T細(xì)胞表面受體(TCR)和/或協(xié)同刺激分子CD28的刺激信號(hào)所活化；PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)T細(xì)胞的發(fā)育及胸腺細(xì)胞的存活意義重大；PI3K/Akt信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的遷移(主要是指組織間的分布)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells, Tregs)是近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn),越來越多的研究表明,抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路能促進(jìn)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(inducible Tregs)的產(chǎn)生。 然而,到目前為止,T細(xì)胞中TCR刺激誘導(dǎo)Akt活化的機(jī)制并不清楚。Akt的分子結(jié)構(gòu)高度保守,包括：1)N-端調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域；2)中心激酶區(qū),含有一個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)(Thr308),可以被稱為PDK1的激酶磷酸化；3)羧基末端調(diào)節(jié)區(qū)域,含有一個(gè)疏水性的基序(hydrophobic motif,HM),可以被稱作PDK2的激酶在絲氨酸位點(diǎn)(Ser473)磷酸化。Akt在這兩個(gè)位點(diǎn)均發(fā)生磷酸化時(shí),該酶的活性才達(dá)到最大。目前的研究中,PDK1已得到一致認(rèn)同,然而長(zhǎng)期以來PDK2卻頗具爭(zhēng)議,MK2 (mitogen-activated protein (MAP) kinase-activated protein kinase-2), ILK (integrin-linked kinase), p38 MAP kinase, PKC-a (protein kinase C-α), PKC-β, NEK6 (the NIMA-related kinase-6), mTORC2 (the mammalian target of rapamycin complex2), DNK-PK (the double-stranded DNA-dependent protein kinase)等都被認(rèn)為是PDK2的候選分子。目前比較公認(rèn)的觀點(diǎn)是調(diào)節(jié)Akt Ser473磷酸化的激酶可能呈細(xì)胞、刺激信號(hào)和底物特異性。 研究證實(shí),PKC-β在B細(xì)胞中調(diào)節(jié)著Akt在Ser473而不是Thr308的磷酸化。但PKC在T細(xì)胞中對(duì)Akt在Ser473的磷酸化調(diào)節(jié)尚無報(bào)道。 采用生物化學(xué)及遺傳學(xué)的方法,本課題首先利用基因敲除小鼠,證實(shí)在T細(xì)胞中的主要PKC亞型PKCθ對(duì)TCR信號(hào)引起的Akt磷酸化無調(diào)節(jié)作用。用非特異性及特異性抑制劑抑制經(jīng)典類PKC (conventional PKC)的亞型發(fā)現(xiàn),TCR信號(hào)引起的Akt Ser473磷酸化比對(duì)照組明顯降低。體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)直接證明T細(xì)胞中這類亞型的PKC-α而不是PKC-β調(diào)節(jié)著Akt在Ser473磷酸化,且這種調(diào)節(jié)呈TCR信號(hào)依賴性。而用PKC-α敲除小鼠的T細(xì)胞驗(yàn)證了這一結(jié)果,并進(jìn)一步證實(shí)PKC-α的缺失引起的Akt在Ser473磷酸化降低導(dǎo)致了Akt下游分子p70S6K和FOXO1/3a磷酸化的降低,而對(duì)另一下游分子GSK3的磷酸化并無影響。最后,用體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)PKC-α對(duì)Akt的調(diào)控不是通過mTOR實(shí)現(xiàn)的。因此,本研究首次證實(shí)PKC-α在T細(xì)胞中TCR信號(hào)途徑下扮演著PDK2的角色 第二部分CTLA-4-B7對(duì)Th17分化的抑制作用的研究 Th17細(xì)胞是一種能分泌白介素17(IL-17)的幫助性細(xì)胞亞群,在一些自身免疫性疾病中起著重要的致病作用作用。研究顯示CD28-B7的相互作用對(duì)Th17細(xì)胞的體外分化是必需的,但是CTLA-4-B7的相互作用對(duì)Th17細(xì)胞分化的調(diào)控作用還不清楚。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)用hCTLA-4Ig或anti-CTLA-4抗體阻斷CTLA-4與B7之間的相互作用可以增強(qiáng)IL-17細(xì)胞因子的生成,增強(qiáng)體內(nèi)和體外Th17細(xì)胞的分化。另外,在CD28基因敲除小鼠體內(nèi)阻斷CTLA-4和B7之間的相互作用能增強(qiáng)其對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎(EAM)的敏感性,而這種作用是由Th17的反應(yīng)增強(qiáng)所介導(dǎo)的�？傊�,我們首次證明了CTLA-4-B7的相互作用能抑制Th17細(xì)胞的分化,從而抑制了Th17介導(dǎo)的自身免疫。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392.1

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