【摘要】： RNA干擾(RNA interference,RNAi)是由雙鏈RNA(double strands RNA,dsRNA)引起的序列特異性轉錄后基因沉默過程,它具有系統(tǒng)性的特性,即該現(xiàn)象可以在細胞或組織間傳遞,或從親代傳遞到子代。線蟲sid-1基因是系統(tǒng)性RNAi關鍵基因,SID-1蛋白可能作為一種膜通道在系統(tǒng)性RNAi中起到轉運dsRNA的作用。在大鼠、小鼠、人等多種動物中均存在sid1的同源基因,根據(jù)其序列同源性又可分為兩個家族sidt1和sidt2,本論文對小鼠sidt2基因的結構和功能進行了相關的初步研究。 小鼠sidt2基因包括兩條序列,即BC051101和BC023957,它們的編碼區(qū)僅長度相差63個堿基,因此將其分別命名為sidt2(1)和sidt2(s)。我們通過RT-PCR檢測了兩條序列的組織表達譜。我們還通過基因組序列比對及PCR對二者進行了染色體定位,并構建可變剪接報告載體,觀察其在細胞內的剪接行為,驗證了二者為同一基因的可變剪接產(chǎn)物。另外,我們通過RNAi技術研究了剪接因子CLK2、SNRPB及hnRNP A1對sidt2可變剪接的影響,發(fā)現(xiàn)當抑制上述剪接因子表達時,內源的sidt2基因的剪接形式并未發(fā)生明顯變化,推測可能與可變剪接機制復雜、參與其中的剪接因子種類復雜等有關;而hnRNPA1的抑制則會導致可變剪接報告載體載細胞內的轉錄受到明顯抑制。 我們還對小鼠sidt2(l/s)進行了蛋白結構預測及亞細胞定位的研究,結果表明SIDT2(L/S)為多重跨膜蛋白,主要定位在細胞的膜系統(tǒng)。根據(jù)大鼠與小鼠sidt2(l)基因的高度同源性,我們分離培養(yǎng)了大鼠的原代肝細胞,并通過RT-PCR驗證其中sidt2(l)占大多數(shù)。siRNA導入實驗發(fā)現(xiàn)FAM標記的siRNA能夠在不借助脂質體的條件下進入大鼠原代肝細胞,提示sidt2(l)基因可能具有協(xié)助siRNA導入細胞的作用。
[Abstract]:RNA interference (RNA interference,RNAi) is a sequence-specific post-transcriptional gene silencing process caused by double-stranded RNA (double strands RNA,dsRNA. It has a systematic characteristic, that is, the phenomenon can be transmitted between cells or tissues, or from parent to offspring. Nematode sid-1 gene is the key gene of systemic RNAi. SID-1 protein may act as a membrane channel to transport dsRNA in systemic RNAi. The homologous genes of sid1 exist in rats, mice, human and other animals. According to their homology, they can be divided into two families: sidt1 and sidt2,. In this paper, the structure and function of mouse sidt2 gene were studied. Mouse sidt2 gene consists of two sequences, BC051101 and BC023957,. Their coding region is only 63 bases different in length, so they are named sidt2 (1) and sidt2 (s). Respectively. We detected the tissue expression profiles of two sequences by RT-PCR. We also mapped the chromosomes by genomic sequence alignment and PCR, and constructed the variable splicing report vector, and observed the splicing behavior in the cells, and verified that they were the same gene variable splicing products. In addition, we studied the effect of splicing factor CLK2,SNRPB and hnRNP A1 on sidt2 variable splicing by RNAi technique. It was found that the splicing form of endogenous sidt2 gene did not change significantly when the splicing factor was inhibited. It may be related to the complexity of the variable splicing mechanism and the complexity of the splicing factors involved in it. The inhibition of hnRNPA1 resulted in significant inhibition of transcription in the cells carrying variable splicing report vector. We also studied the protein structure prediction and subcellular localization of mouse sidt2 (l / s). The results showed that SIDT2 (L / S) was a multiple transmembrane protein, mainly located in the cell membrane system. According to the high homology of sidt2 (l) gene between rats and mice, we isolated and cultured rat primary hepatocytes. The results of RT-PCR analysis showed that sidt2 (l) was the majority of them. The results of siRNA transfection showed that the siRNA labeled by FAM could enter into rat primary hepatocytes without liposome, suggesting that sidt2 (l) gene might be helpful to the introduction of siRNA into rat hepatocytes.
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R346

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉一沉;任長虹;王航雁;張成崗;;不均一性核糖核蛋白(hnRNP)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2010年01期

2 ;科研快訊[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2010年02期

3 章躍陵;趙賢亮;嚴芳;;無脊椎動物免疫分子的多態(tài)性[J];中國生物化學與分子生物學報;2010年03期

4 杭興宜;鄧明華;孫志賢;張成崗;;外顯子芯片的數(shù)據(jù)分析和可變剪接預測的新算法[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2009年05期

5 劉舒云;李潔;陳留存;曹國軍;李少華;趙強;丁紅梅;高亞萍;劉農樂;王芳;楊光;邵寧生;;小鼠sidt2基因的可變剪接驗證[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2008年05期

6 程虹;張曉暉;劉柏麟;沈萬安;馬福成;;雌激素對大鼠肝臟B族清道夫受體異構體表達的調節(jié)作用[J];第四軍醫(yī)大學學報;2007年07期

7 余松;薛愛民;賀盟;趙子琴;沈憶文;顧云菊;;皮膚成纖維細胞纖維連接蛋白及其EDA、EDB表達與損傷時間的關系[J];法醫(yī)學雜志;2007年03期

8 劉寧國;陳憶九;盧仁泉;黃曉華;張建華;;Fn-EIIIA金標單克隆抗體試紙條的試制和初步應用[J];法醫(yī)學雜志;2006年02期

9 胡寶山;丁悅;李春海;劉尚禮;呂浩然;葉偉;;纖維粘連蛋白EDA~+片段在退變椎間盤中的表達及其意義[J];中國矯形外科雜志;2006年05期

10 遲曉云;徐麗慧;查慶兵;何賢輝;;PD-L1基因在正常胃和胃癌組織中的表達及其可變剪接變異體的鑒定[J];暨南大學學報;2006年02期

相關會議論文 前10條

1 富顯果;張朵;張曉;柯龍鳳;嚴愛貞;朱忠勇;蘭風華;;脆性X智力障礙1基因一個新型可變剪接外顯子的鑒定[A];Programme and Abstracts of the International Symposium on Medical and Pharmaceutical Biotechnology[C];2009年

2 富顯果;張朵;張曉;柯龍鳳;嚴愛貞;朱忠勇;蘭風華;;脆性X智力障礙1基因新型可變剪接外顯子和剪接異構體的鑒定[A];第八次全國醫(yī)學遺傳學學術會議(中華醫(yī)學會2009年醫(yī)學遺傳學年會)論文摘要匯編[C];2009年

3 劉彥山;趙秀麗;楊威;張學;;一例先天性無痛伴無汗癥的NTRK1基因致病突變研究[A];第八次全國醫(yī)學遺傳學學術會議(中華醫(yī)學會2009年醫(yī)學遺傳學年會)論文摘要匯編[C];2009年

4 沈栩;聶慶華;張細權;;雞GARNL1基因一種新的選擇性剪接體的鑒定和組織表達分析[A];中國家禽科學研究進展——第十四次全國家禽科學學術討論會論文集[C];2009年

5 范瑞文;董常生;李鵬飛;白瑞;朱芷葳;;核糖體蛋白L34(RPL34)在白色青年羊駝皮膚內表達的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物解剖學及組織胚胎學分會第十五次學術研討會論文集[C];2008年

6 曾昕;江潞;陳謙明;;ORAOV1可變剪接ORAOV1-A的表達與口腔鱗狀細胞癌的分化相關[A];第七屆全國口腔黏膜病暨第五屆口腔中西醫(yī)結合大會論文匯編[C];2008年

7 任偉;陸超;張永梅;周國平;;兩種新的干擾素調節(jié)因子-3剪接異構體的結構及表達[A];中華醫(yī)學會第五次全國兒科中青年學術交流大會論文匯編（上冊）[C];2008年

8 馬惠姿;顧衛(wèi)紅;王國相;郝瑩;李麗林;王康;楊斯柳;段曉慧;;48個遺傳性舞蹈病家系臨床表型和基因突變分析[A];第十一屆全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編[C];2008年

9 黃艷群;李寧;;雞Lmbrl剪接變異體的鑒定[A];中國家禽業(yè)——機遇與挑戰(zhàn)——第十三次全國家禽學術討論會論文集[C];2007年

10 程虹;劉柏麟;沈萬安;張菊;;雌激素對大鼠肝臟B族清道夫受體異構體表達的調節(jié)作用[A];中華醫(yī)學會病理學分會2007年學術年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

相關重要報紙文章 前4條

1 記者 韓曉玲　通訊員 王懷民;武大教授揭示致癌蛋白作用新機制[N];湖北日報;2010年

2 記者 趙鳳華　通訊員 王懷民;我科學家“看清”PTB蛋白是如何致癌的[N];科技日報;2010年

3 駐鄂記者 錢忠軍　通訊員 王懷民;揭示致癌蛋白作用新機制[N];文匯報;2010年

4 魯偉　王懷民;我科學家揭示致癌蛋白作用新機制[N];科學時報;2010年

相關博士學位論文 前10條

1 劉舒云;小鼠基因sidt2的可變剪接研究及功能初步探討[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2008年

2 張欣;基于序列聯(lián)配的高效可變剪接模式搜索算法和軟件[D];上海交通大學;2006年

3 吳家雪;人LC3B-β的鑒定及其對LC3B-α的負反饋調節(jié)機制[D];復旦大學;2006年

4 曹文廣;花球發(fā)育調控機制的研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2005年

5 吳家紅;白紋伊蚊對溴氰菊酯抗藥性相關基因的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

6 杜喜玲;水稻和玉米組織特異表達基因的克隆及功能分析[D];復旦大學;2004年

7 諸葛堅;細胞色素P450 2D6和2C18的可變剪接研究[D];浙江大學;2003年

8 林長發(fā);水稻葉特異表達基因及蘋果酸脫氫酶基因的克隆和功能分析[D];復旦大學;2003年

9 盧家紅;α7nAChR的克隆、表達及在Alzheimer病發(fā)病機制中作用的研究[D];復旦大學;2003年

10 汪俊華;PHF2、M961及ASH2L1全長cDNA克隆及其與人多潛能白血病細胞分化相關性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1999年

相關碩士學位論文 前10條

1 邢永強;模式生物基因組中可變剪接位點的預測及序列特征分析[D];內蒙古大學;2009年

2 李燕;SMYD3在牛卵母細胞體外成熟過程中表達及功能的研究[D];內蒙古大學;2009年

3 龐劍會;利用feeding RNAi技術篩選線蟲體內低氧應答剪接相關因子的研究[D];西北農林科技大學;2009年

4 張曉娜;中國人群組織特異性可變剪接體的鑒定[D];上海交通大學;2008年

5 韓冷;一種挖掘mRNA可變剪接變體的新技術[D];蘇州大學;2008年

6 尹曉敏;Dyrk1A對剪接因子SRp55磷酸化作用的研究[D];南通大學;2008年

7 郭建秀;一種新的乳腺珠蛋白（hMAM）異構體及其在乳腺癌細胞中的表達[D];第三軍醫(yī)大學;2006年

8 武兆飛;家兔組胺H3受體基因克隆及可變剪接鑒定[D];大連醫(yī)科大學;2006年

9 王玉鋒;小麥全長cDNA pool的制備和低親和性離子轉運蛋白LCT1基因及剪接變異體的克隆及在煙草中的表達[D];山東大學;2006年

10 遲曉云;PD-L1和PD-L2在正常人和胃癌患者PBMC及胃組織中的表達分析[D];暨南大學;2006年

，

本文編號：2341142