【摘要】：目的:構(gòu)建改造的人血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶基因啟動(dòng)子,利用氯化鈷誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞-12缺氧模型研究其基因啟動(dòng)子活性變化。方法:含SP1替換SP3突變序列的引物通過(guò)PCR構(gòu)建突變啟動(dòng)子pGL2-eNOS-repSP3載體,將已經(jīng)構(gòu)建好的pGL2-eNOS-repSP3載體和pGL2-eNOS分別轉(zhuǎn)染HUVEC-12細(xì)胞,并以之前構(gòu)建的SP1插入eNOS啟動(dòng)子改構(gòu)體pGL2-eNOS-insSP1為陽(yáng)性對(duì)照,通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)檢測(cè)并比較不同濃度氯化鈷刺激下eNOS啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的變化。結(jié)果:成功構(gòu)建了含SP1替換SP3突變序列的eNOS啟動(dòng)子改構(gòu)體。氯化鈷刺激后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,改構(gòu)體eNOS啟動(dòng)子活性在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)隨氯化鈷劑量增加而升高的趨勢(shì);SP1替換SP3的eNOS啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性與SP1插入的eNOS啟動(dòng)子之間無(wú)顯著差異。結(jié)論:pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS-insSP1兩種改造方法在轉(zhuǎn)錄活性上沒(méi)有顯著差別。
[Abstract]:Aim: to construct a modified human vascular endothelial cell nitric oxide synthase gene promoter, and to investigate the activity of nitric oxide synthase gene promoter in human umbilical vein endothelial cell line 12 induced by cobalt chloride. Methods: the primers containing SP1 to replace the SP3 mutation sequence were used to construct the pGL2-eNOS-repSP3 vector of the mutant promoter by PCR. The constructed pGL2-eNOS-repSP3 vector and pGL2-eNOS were transfected into HUVEC-12 cells respectively. Using previously constructed SP1 inserted eNOS promoter pGL2-eNOS-insSP1 as positive control, the transcriptional activity of eNOS promoter was detected and compared under different concentrations of cobalt chloride by double luciferase reporter gene technique. Results: eNOS promoter with SP1 replacement SP3 mutation sequence was successfully constructed. The activity of eNOS promoter increased with the increase of cobalt chloride dose in a certain range, but there was no significant difference between the transcriptional activity of eNOS promoter replaced by SP1 and the eNOS promoter inserted by SP1. Conclusion: there is no significant difference in transcriptional activity between pGL2-eNOS-repSP3 and pGL2-eNOS-insSP1.
【作者單位】： 暨南大學(xué)組織移植與免疫中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30471635,30971465) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(04010451,5006033) 暨南大學(xué)“211工程”基金資助項(xiàng)目(2009年)
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2331900