【摘要】： 目的應(yīng)用成熟的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(A-MSC)的分離培養(yǎng)技術(shù),深入研究其生物學(xué)特性及支持造血的功能,以促進(jìn)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞臨床的廣泛應(yīng)用,尤其為臨床進(jìn)行MSC與HSC共移植、提高HSC移植成功率提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 方法1、采用已建立的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)分離培養(yǎng)體系進(jìn)行羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化及擴(kuò)增;2、收集傳代培養(yǎng)的第三代細(xì)胞10~6個數(shù)量級,采用RT-PCR方法在mRNA水平上分析LIF,SCF,M-CSF,G-CSF,MG-CSF,IL-3,IL-6,IL-11等因子在體外培養(yǎng)的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(A-MSC)中的表達(dá)情況;3、將去貼壁細(xì)胞的臍血單個核細(xì)胞接種到經(jīng)X射線照射的第三代人羊膜MSC單層滋養(yǎng)層上,采用長期培養(yǎng)體系(MethoCult~(TM)H5100)培養(yǎng),每周半量換液,臍血單個核細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)作為對照,分別收集兩組第3d、第7d、第14d、第21d培養(yǎng)液中的懸浮細(xì)胞,通過細(xì)胞計(jì)數(shù),評價人羊膜MSC體外支持造血功能。 結(jié)果可檢測到人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(A-MSC)表達(dá)LIF,SCF,M-CSF,G-CSF,MG-CSF,IL-3,IL-6,IL-11等多種造血調(diào)控因子;通過定期計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中的懸浮細(xì)胞,表明羊膜MSC具有體外支持造血的功能。 結(jié)論1、組織塊植塊培養(yǎng)法是一種比較理想的體外分離、培養(yǎng)、純化、擴(kuò)增人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。2、本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了人羊膜組織與造血之間的相關(guān)性,同時初步證實(shí)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞具有造血支持作用,提示人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞與造血干細(xì)胞聯(lián)合移植將可能有效地促進(jìn)造血恢復(fù)和植入。
[Abstract]:Objective to study the biological characteristics and hematopoietic support of mature human amniotic mesenchymal stem cells (A-MSC) in order to promote the clinical application of amniotic mesenchymal stem cells (MMSCs). Especially for clinical MSC and HSC co-transplantation to improve the success rate of HSC transplantation to provide experimental evidence. Methods 1. The amniotic membrane mesenchymal stem cells (MSCs) were isolated, cultured, purified and amplified by the established mesenchymal stem cell (MSC) isolation and culture system. 2. The third generation cells of 10 ~ 6 orders of magnitude were collected and LIF,SCF,M-CSF,G-CSF,MG-CSF,IL-3,IL-6, was analyzed on the mRNA level by RT-PCR method. Expression of IL-11 and other factors in human amniotic mesenchymal stem cells (A-MSC) cultured in vitro; 3. Umbilical cord blood mononuclear cells (UCB) were inoculated into the third generation of human amniotic membrane MSC monolayer trophoblastic layer irradiated by X ray. The mononuclear cells were cultured in a long-term culture system (MethoCult~ (TM) H5100). Cord blood mononuclear cells were cultured alone as control. Suspension cells were collected from the culture medium on the 3rd, 7th, 14th and 21st day, respectively. The hematopoietic function of human amniotic membrane MSC was evaluated by cell count. Results Human amniotic mesenchymal stem cells (A-MSC) expressed LIF,SCF,M-CSF,G-CSF,MG-CSF,IL-3,IL-6,IL-11 and other hematopoietic regulatory factors. The suspension cells in the culture medium were counted regularly, indicating that amniotic membrane MSC has the function of supporting hematopoiesis in vitro. Conclusion 1. Tissue block culture is an ideal method for isolating, culturing, purifying and amplifying human amniotic mesenchymal stem cells in vitro. 2. The correlation between human amniotic membrane tissue and hematopoiesis was confirmed. At the same time, human amniotic mesenchymal stem cells had hematopoietic support, suggesting that combined transplantation of human amniotic mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells might promote hematopoietic recovery and implantation.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R329

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本文編號：2328830