【摘要】：脊柱類動物的眼因其功能是一個非常特殊的器官，因其特殊的結(jié)構(gòu)和屈光系統(tǒng)一直是神經(jīng)發(fā)育學(xué)學(xué)科中的研究熱點。眼睛是由幾個胚層來源的不同部分，經(jīng)過一系列的誘導(dǎo)作用和時間，空間上的協(xié)調(diào)，所形成的一個具有精確功能的器官。眼的發(fā)育主要包括角膜、晶狀體及視網(wǎng)膜發(fā)育，發(fā)育過程與神經(jīng)細胞的遷移、增殖、分化密切相關(guān)。本課題選用C57BL/6J小鼠，對E8至P180年齡段的正常小鼠的角膜、晶狀體及視網(wǎng)膜發(fā)育過程中神經(jīng)干細胞的增殖，神經(jīng)細胞的分化，細胞的凋亡以及重要調(diào)控蛋白的表達進行了系統(tǒng)的研究。另外，，有研究表明，神經(jīng)鞘磷脂合成酶2基因敲除（sphingomyelin synthase2knockout, SMS2-/-）會造成體內(nèi)神經(jīng)酰胺的堆積，神經(jīng)酰胺的堆積是否會影響小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞增殖與雙極細胞的發(fā)育，有關(guān)這方面的研究較少。本課題選用SMS2-/-小鼠，應(yīng)用免疫細胞化學(xué)及BrdU標(biāo)記增殖細胞技術(shù)，對該問題進行研究，這將有助于我們深入理解視網(wǎng)膜的發(fā)育及神經(jīng)酰胺的作用機制。 目的：探討角膜細胞的增殖與凋亡對角膜結(jié)構(gòu)修復(fù)與塑形的作用；探討晶狀體細胞增殖對晶狀體發(fā)生的作用及其與細胞周期之間的關(guān)系，研究Synaptophysin蛋白在晶狀體發(fā)生過程中的作用；探討視網(wǎng)膜細胞增殖與細胞周期之間的關(guān)系，以及視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞分化和突觸連接形成對感光信息傳遞的作用；探討神經(jīng)酰胺堆積對視網(wǎng)膜發(fā)育的影響。 方法：本課題應(yīng)用HE染色、免疫熒光和BrdU技術(shù)等技術(shù)對胚胎和出生后小鼠角膜、晶狀體、視網(wǎng)膜進行形態(tài)學(xué)觀察，對視網(wǎng)膜BrdU和CyclinD1陽性細胞密度進行測量。 結(jié)果：1.小鼠角膜的發(fā)生與細胞凋亡 胚胎發(fā)育及出生后早期，角膜以實質(zhì)層的發(fā)育為主。P14左右，角膜上皮細胞層開始增殖分化為兩層細胞，同時內(nèi)皮細胞也開始分化。至P30時，我們可以辨別出角膜的六層結(jié)構(gòu)。BrdU陽性細胞主要存在實質(zhì)層中成纖維細胞，出生以后也可見于角膜上皮細胞層和內(nèi)皮細胞層。隨著角膜發(fā)育，P10左右，其它層的BrdU陽性細胞都消失，僅存在于角膜上皮細胞層。PCNA陽性細胞在發(fā)育早期散在分布在角膜的各層，P14以后PCNA陽性細胞均勻的分布在角膜上皮細胞的基底層，并維持在穩(wěn)定狀態(tài)。在角膜發(fā)育早期，在各層可見許多細胞凋亡。 2.小鼠晶狀體發(fā)育過程中細胞增殖及Synaptophysin蛋白的表達 E8左右，晶狀體由最初的晶狀體板分化而來，是由單層柱狀上皮細胞圍成的空泡，空泡再進一步分化，被原始晶狀體纖維所替代，逐漸形成晶狀體；BrdU和PCNA的陽性細胞主要分布在晶狀體上皮細胞的前囊中央?yún)^(qū)，但P10以后BrdU陽性細胞已不在晶狀體上皮細胞分布，而PCNA持續(xù)表達。Cyclin D1陽性細胞在胚胎期主要在晶狀體上皮細胞的赤道部表達，出生早期在晶狀體上皮細胞的前囊中央?yún)^(qū)，P5以后在赤道前區(qū)分布，赤道部有少量陽性細胞；在晶狀體發(fā)育過程中，Synaptophysin可以在晶狀體的基質(zhì)中和赤道部的胞體中發(fā)現(xiàn)。 3.小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的分化與突觸的形成 胚胎及出生后早期，Sox2和Cyclin D1主要分布在神經(jīng)母細胞層和神經(jīng)節(jié)細胞層，P5以后隨著DCX遷移至內(nèi)顆粒層，Sox2在P10以后未見分布，Cyclin D1在P14以后未見分布；神經(jīng)節(jié)細胞是最早產(chǎn)生和分化成熟的神經(jīng)元，然后是水平細胞、視錐視桿細胞、無長突細胞、雙極細胞，其中，DCX在水平細胞中表達，在胚胎期及出生后早期，DCX在神經(jīng)母細胞層標(biāo)記的是未成熟的水平細胞；在胚胎期及出生早期SYN分布在神經(jīng)母細胞層的中外三分之一處，隨著小鼠的發(fā)育，SYN最終分布在外網(wǎng)層與水平細胞的接壤處。同時SYN持續(xù)在內(nèi)網(wǎng)層表達。 4. WT和SMS2-/-仔鼠視網(wǎng)膜發(fā)育情況比較 對WT和SMS2-/-仔鼠小鼠視網(wǎng)膜內(nèi)BrdU和PKC-α陽性細胞數(shù)進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)BrdU和PKC-α陽性細胞密度無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P0.05。 結(jié)論：①首先在角膜的發(fā)育過程中，角膜的發(fā)育與其感光功能形成的過程相一致，角膜干細胞的增殖與其修復(fù)有關(guān)；有大量的凋亡細胞參與角膜結(jié)構(gòu)的塑形。②其次在晶狀體的發(fā)育過程中，細胞增殖對晶狀體發(fā)育和晶狀體的修復(fù)起著重要的作用；細胞周期蛋白Cyclin D1可能參與到調(diào)控赤道部細胞的消失，因此晶狀體的透明度可以保持；Synaptophysin在晶狀體的表達說明了它對晶狀體的透明有著重要的作用，通過調(diào)控鈣離子內(nèi)流入胞體和基質(zhì)中。③最后在視網(wǎng)膜的整個發(fā)育過程中，Cyclin D1細胞周期蛋白與Sox2轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜祖細胞的增殖分化，確保在開眼時視網(wǎng)膜祖細胞分化成視網(wǎng)膜的各個神經(jīng)元，保證視網(wǎng)膜神經(jīng)元發(fā)揮功能；視網(wǎng)膜的神經(jīng)細胞的產(chǎn)生有著特定的高度保守的順序，其分化成熟與視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)功能成熟相一致；大量的突觸素分布在內(nèi)外網(wǎng)層，保證光感受器的信息在垂直方向上向前傳遞的同時，又向側(cè)向擴散；④神經(jīng)酰胺可能不參與調(diào)節(jié)小鼠視網(wǎng)膜的發(fā)育。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 夏朝霞;馮志貞;陳向華;吳藝;;小鼠晶狀體連續(xù)發(fā)育模型的建立[J];臨床眼科雜志;2011年05期

2 楊竹林,李永國,鐘德s

本文編號：2327110