【摘要】： 目的:構建LPS誘導大鼠心肌細胞炎癥損傷模型,觀察αBC對LPS誘導的大鼠心肌細胞炎癥反應的保護作用,并闡明其可能機制。 方法:1.將大鼠心肌H9c2細胞于42.5℃水浴箱中熱休克1h,然后恢復37℃,5%CO_2恒溫培養(yǎng)0min,30min,60min,6h,12h,24h后收集細胞,并收集未作熱休克處理的細胞作為對照,免疫印跡檢測Hsp25,Hsp27,Hsp90以及αBC的表達。 2.(1)對高表達αBC的大鼠心肌細胞以及野生型大鼠心肌細胞,采用LPS(100ng/ml)分別培養(yǎng)30min,1h,2h,同時采用未加入LPS刺激的細胞作為空白對照,提取蛋白用于免疫印跡檢測IκB激活。(2)對H9c2大鼠心肌細胞株瞬時轉染NFκB-luc質粒、pRL-SV40質粒、PCI或PCI-αBC質粒,采用LPS(100ng/ml)培養(yǎng)2h后收集細胞,同時將未加入LPS刺激的細胞作為空白對照,進行NF-κB報告基因活性的檢測。 3.對高表達αBC的大鼠心肌細胞以及野生型大鼠心肌細胞,采用LPS(100ng/ml)分別培養(yǎng)30min,1h,2h,同時采用未加入LPS刺激的細胞作為空白對照,提取蛋白用于免疫印跡檢測Akt以及MAPK信號通路的激活。 結果: 1.H9c2細胞熱休克處理后恢復不同時間點,Hsp90表達未見顯著性變化。Hsp25,Hsp27以及αBC均于恢復1h起表達開始上調(P＜0.05),12h達高峰,其后略有下降。 2.αBc對大鼠心肌細胞LPS誘導NF-κB激活具有保護作用 (1)αBC高表達減少LPS誘導大鼠心肌細胞IκB的激活。LPS處理后30min起IκB即降解(P＜0.05),至1h進一步降解,且αBC及對照組間有顯著性差異(P＜0.05),隨后恢復,至2h兩者均基本恢復至正常水平。(2)大鼠心肌細胞中αBC抑制了LPS誘導的NF-κB激活。NF-κB報告基因檢測顯示,LPS處理后2h NF-κB已被激活(P＜0.05),且αBC組顯著低于PCI組(P＜0.05)。 3.(2)αBC高表達減少LPS誘導的大鼠心肌細胞MAPK通路的激活。LPS處理30min起,H9c2細胞JNKs,ERKs,P38即被激活,至2hαBC組JNKs,ERKs,P38磷酸化激活程度均顯著低于對照組(P＜0.05)。(3)αBC高表達增強LPS誘導的大鼠心肌細胞Akt通路的激活。LPS處理30min后,H9c2細胞Akt磷酸化水平增加(P＜0.05),但與對照組相比較,30min和2h時間點穩(wěn)定轉染αBC組的Akt磷酸化水平進一步增強(P＜0.05)。 結論:αBC對LPS誘導的大鼠心肌細胞炎癥反應具有保護作用,對其機制初步探討可能與αBC下調了NFκB、MAPK信號通路的激活以及上調了Akt的激活有關。
[Abstract]:Aim: to establish a rat model of myocardial inflammatory injury induced by LPS, to observe the protective effect of 偽 BC on the inflammatory response of rat cardiomyocytes induced by LPS, and to elucidate its possible mechanism. Methods: 1. Rat myocardial H9c2 cells were subjected to heat shock at 42.5 鈩，

本文編號：2319486