發(fā)布時間：2018-11-07 18:20

【摘要】： 目的:建立兔動脈粥樣硬化動物模型,經(jīng)兔耳緣靜脈行自體骨髓單個核細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療,觀察自體骨髓單個核細胞和間充質(zhì)干細胞能否歸巢至腹主動脈及其在腹主動脈中的分布,評價降脂療效,初步探討移植細胞在動脈粥樣硬化修復中的作用及其可能的機制,并進行兩種細胞對動脈粥樣硬化修復的療效比較。 方法:①細胞分離純化:分別用氯化銨破碎紅細胞法和貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)兔骨髓單個核細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞。②骨髓間充質(zhì)干細胞生物學特性鑒定:倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長及形態(tài),免疫細胞化學染色鑒定細胞表面標記物CD34、CD105、CD106的表達。③BrdU標記移植細胞:BrdU標記移植骨髓單個核細胞及骨髓間充質(zhì)干細胞,觀察標記率。④兔體內(nèi)實驗:高脂飲食喂養(yǎng)法制作動脈粥樣硬化動物模型,造模后第10周經(jīng)耳緣靜脈行自體骨髓單個核細胞及間充質(zhì)干細胞移植治療,分別在造模前、造模第5周、造模第10周及干細胞移植后第3、7、14、21、28天行血脂檢測、腹主動脈病理學分析及BrdU免疫組化分析。 結(jié)果:①骨髓干細胞生物學鑒定:新鮮接種的BMMNCs為圓形,大小均一,4小時開始貼壁,接種24小時后即有少量圓形細胞貼壁,接種72小時貼壁細胞明顯增多,部分已伸出偽足變?yōu)樗笮?第7天左右細胞呈現(xiàn)克隆性生長,呈MSCs特征性的旋渦狀生長,細胞形態(tài)多呈梭形,并含少量圓形細胞。P1-P3代細胞生長速度明顯增快,細胞體積明顯增大,多表現(xiàn)為長梭形、多角形,細胞形態(tài)及生長方向漸趨于一致。實驗所采用的P3代細胞CD34染色均呈陰性反應,而CD105、CD106染色陽性細胞在＞98%以上。②移植細胞的標記:以20μmol/L的BrdU孵育骨髓單個核細胞72h及以30μmol/L的BrdU孵育骨髓MSCs72h的陽性標記率均達95%以上,而標記組細胞形態(tài)、生長和增殖與對照組未見明顯差異。③血脂檢測:造模前各組甘油三脂(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平值沒有顯著性差異,造模第5周造模組各組TG、TC、LDL-C值達最高水平,HDL-C達最低水平.造模第10周造模組各組TG、TC、LDL-C、HDL-C與第5周無明顯差異.干細胞移植后第7天移植組血脂水平低于對照組,三組間兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05);至第21天對照組TG、TC、HDL-C、LDL-C分別為(4.65±0.95)mmol/L、(16.09±1.89)mmol/L、(1.55±0.50)mmol/L、(9.37±1.26)mmol/L,骨髓MSCs移植組TG、TC、HDL-C、LDL-C分別為(2.88±0.49)mmol/L、(13.70±3.52)mmol/L、(2.35±0.50)mmol/L、(3.11±1.16)mmol/L,BMMNCs移植組TG、TC、HDL-C、LDL-C分別為(1.11±0.20)mmol/L、(1.37±0.38)mmol/L、(5.34±0.75)mmol/L、(0.61±0.33)mmol/L,三組間兩兩比較差異極顯著(P＜0.01)。④腹主動脈病理學觀察:高脂飼料喂養(yǎng)第10周各模型組肉眼可見大量灰黃色斑點及條紋狀脂質(zhì),向內(nèi)膜表面顯著隆起。光鏡下,內(nèi)膜顯著增厚、水腫、內(nèi)膜下有大量泡沫細胞、少許炎癥細胞,未見膽固醇結(jié)晶。兩移植組分別移植MSCs和BMMNCs后28天,動脈粥樣斑塊減輕,顯逆轉(zhuǎn)趨勢,明顯好于對照組,兩移植組之間無明顯差異。⑤腹主動脈組織BrdU免疫組織化學分析:骨髓MSCs移植組和BMMNCs移植組于移植后各時間點腹主動脈組織BrdU染色均呈陰性。 結(jié)論:①高脂飼料喂養(yǎng)10周,成功復制兔腹主動脈粥樣硬化和高脂血癥。②經(jīng)靜脈輸注骨髓單個核細胞移植和骨髓間充質(zhì)干細胞移植均有一定降脂、逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化斑塊的作用。③擴增培養(yǎng)后的骨髓間充質(zhì)干細胞對于高脂血癥的療效優(yōu)于骨髓單個核細胞。④經(jīng)耳緣靜脈移植的骨髓干細胞未遷移并定居于腹主動脈,未直接參與動脈粥樣硬化血管結(jié)構(gòu)和功能的修復。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R-332;R543.5

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本文編號：2317203