【摘要】： 目的：通過建立大鼠腎缺血-再灌注損傷(IRI)模型,觀察低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)在缺血-再灌注腎組織中的表達變化,并采用高壓氧(HBO)和丹參酮ⅡA(TanⅡA)對腎IRI進行干預(yù),深入研究腎IRI的發(fā)生機制以及高壓氧和丹參酮ⅡA對腎IRI的影響,為臨床應(yīng)用HBO和TanⅡA防治腎IRI提供理論依據(jù)。 材料和方法：Wistar大鼠84只,隨機分為正常對照組、缺血組、缺血-再灌注組(1h、3h、5h組)、高壓氧治療組(1h、3h、5h組)、丹參酮ⅡA治療組(1h、3h、5h組)以及假手術(shù)組(1h、3h、5h組),每組6只。各組均先切除右腎。正常對照組在切除右腎的同時切取左腎備用,假手術(shù)組不阻斷左腎動脈,其余各組則建立左腎IRI模型進行研究。之后,分別于相應(yīng)時點切取左腎,其部分皮髓質(zhì)經(jīng)4%多聚甲醛固定后石蠟包埋,切片行HE染色和免疫組化檢測HIF-1α蛋白的表達；另一部分則采用實時熒光定量PCR檢測HIF-1αmRNA的表達。取腎后經(jīng)下腔靜脈采血,采用全自動生化分析儀和放射免疫法分別檢測血中BUN、SCr、MDA和TNF-α的含量。 結(jié)果：①BUN在假手術(shù)組5h、HIF-1α蛋白表達在假手術(shù)組3h、HIF-1αmRNA表達在假手術(shù)組1h增高與正常對照組比較,差異有顯著性(P0.05)。 ②BUN、SCr、MDA、TNF-α均分別按正常對照組、缺血組、缺血-再灌注組(1h、3h、5h組)依次增高,差異有顯著性(P0.05)。HIF-1αmRNA的表達按缺血-再灌注組1h、缺血-再灌注組5h、正常對照組、缺血-再灌注組3h、缺血組依次增高,其中缺血-再灌注組5h與正常對照組比較差異無顯著性(P0.05),其余各組比較差異有顯著性(P0.05)。HIF-1α蛋白的表達在缺血組和缺血-再灌注組均呈高表達,與正常對照組比較,差異有顯著性(P0.05)。 ③經(jīng)高壓氧處理后,與缺血-再灌注組比較：血中BUN、SCr、MDA和TNF-α的含量顯著降低,HIF-1αmRNA的表達水平增高,差異有顯著性(P0.05),而HIF-1α蛋白的表達變化不明顯(仍呈高表達),差異無顯著性(P0.05)。 ④經(jīng)丹參酮ⅡA處理后,與缺血-再灌注組比較：血中BUN、SCr、MDA和‘TNF-α的含量以及腎組織HIF-1α蛋白的表達水平均顯著降低,而HIF-1αmRNA的表達水平增高,差異有顯著性(P0.05)。 ⑤相關(guān)性分析：根據(jù)腎組織HIF-1αmRNA和HIF-1α蛋白的表達水平和血BUN、SCr、MDA、TNF-α結(jié)果行相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)MDA與BUN(r=0.0.633,P0.01),MDA與SCr (r=0.475,P0.01), TNF-α與BUN(r=0.702, P0.01), TNF-α與SCr(r= 0.706, P0.01), TNF-α與MDA(r= 0.577, P0.01), TNF-α與HIF-1α蛋白的表達水平(r=0.257,P0.037)和BUN與SCr(r=0.514,P=0.000)具有顯著的正相關(guān)性,而BUN與HIF-1αmRNA的表達水平具有顯著的負相關(guān)性(r=-0.260,P0.035) ⑥病理結(jié)果：與正常對照組比較,假手術(shù)組的組織結(jié)構(gòu)變化不明顯,缺血組則出現(xiàn)腎間質(zhì)、腎小球小血管淤血和腎小管上皮細胞水腫。再灌注1h時,腎小管上皮細胞明顯水腫,而且腎小球和腎間質(zhì)充血明顯；再灌注3h、5h時,除見充血、水腫外,另見腎小管上皮細胞脂肪變性及細胞內(nèi)玻璃樣變,個別腎小管腔內(nèi)見蛋白管型。高壓氧處理后與缺血-再灌注組比較,僅在5h時見組織充血明顯減輕,而1h和3h時組織變化不明顯。丹參酮ⅡA處理后,在各時間點僅個別標(biāo)本中見腎小管上皮細胞水腫、細胞內(nèi)玻璃樣變及脂肪變性、腎間質(zhì)和腎小球充血以及蛋白管型,總體病變程度較高壓氧治療組和缺血-再灌注組輕。 結(jié)論：①手術(shù)本身的創(chuàng)傷對BUN的含量和HIF-1α的表達有影響。 ②腎缺血-再灌注后,MDA和TNF-α含量增高以及腎組織中HIF-1α蛋白的高表達是加重腎功能損害的重要原因。 ③丹參酮ⅡA對腎組織中HIF-1α蛋白的表達具有明顯的抑制作用,這可能是腎缺血-再灌注后丹參酮ⅡA產(chǎn)生腎保護效應(yīng)的重要機制。而抑制再灌注后氧自由基和TNF-α的產(chǎn)生則是丹參酮ⅡA和高壓氧產(chǎn)生腎保護效應(yīng)的共同通路。 ④高壓氧對腎組織中HIF-1α蛋白的表達無明顯的抑制作用,表明再灌注后高壓氧可能沒有通過HIF-1α環(huán)節(jié)發(fā)揮腎保護作用。 ⑤丹參酮ⅡA和高壓氧雖然能促進再灌注后腎組織中HIF-1αmRNA的表達,但是丹參酮ⅡA能明顯抑制HIF-1α蛋白的表達,說明丹參酮ⅡA對HIF-1α的表達可能具有雙向調(diào)節(jié)作用。
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【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R285.5;R363

【參考文獻】

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1 畢長柏,徐麗瑾,陳玉敏,于哩哩,郭紅梅,馬洪駿;高壓氧對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織結(jié)構(gòu)及氧自由基的影響[J];實用兒科臨床雜志;2005年02期

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本文編號：2315813