發(fā)布時間：2018-10-31 18:18

【摘要】： Ⅰ型單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus 1,HSV-1)是一種常見的病原體,人是其唯一自然宿主。病毒通過受損皮膚及粘膜感染宿主,在上皮組織增殖,且能進(jìn)一步從感染的上皮組織的神經(jīng)末稍入侵神經(jīng)元,并于初次感染后在三叉神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)節(jié)等處建立伴隨終生的潛伏性感染。 HSV-1 UL25基因編碼一個重要的病毒衣殼蛋白,位于衣殼外表面五鄰體頂角附近。目前研究發(fā)現(xiàn)該蛋白參與了病毒感染過程中的許多重要生物學(xué)過程,包括病毒在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運、增殖、裝配等。利用酵母雙雜交篩選技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)UL25與宿主細(xì)胞不同的結(jié)構(gòu)性和功能性蛋白存在相互作用,其中之一為與細(xì)胞骨架微管蛋白的相互作用。半乳糖苷酶活性分析實驗顯示兩者的相互作用具有特異性。 將UL25重組到綠色熒光報告載體pEGFP-N2中,對構(gòu)建的UL25-EGFP融合蛋白進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)熒光分析,結(jié)果表明UL25分布于細(xì)胞質(zhì)中,與經(jīng)免疫熒光染色的細(xì)胞骨架微管蛋白共定位。進(jìn)一步利用秋水仙堿破壞細(xì)胞骨架微管結(jié)構(gòu)后,發(fā)現(xiàn)UL25的分布與紊亂的微管蛋白亦基本重合,表明兩者在空間上具有明確的相互作用關(guān)系。由于HSV病毒在被感染細(xì)胞內(nèi)沿細(xì)胞骨架微管移動,基于上述雙雜交實驗和熒光分析,推測UL25可能在病毒衣殼細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運中具有重要的意義。 實驗進(jìn)一步對UL25基因不同片段的缺失突變體進(jìn)行熒光定位分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)UL25 135-353aa和其羧基端360-580aa與UL25蛋白定位相似,而UL25氨基端140aa除在胞質(zhì)內(nèi)與微管蛋白共定位外,還同時定位于細(xì)胞核中。結(jié)合酵母雙雜交實驗篩選到UL25與細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白如轉(zhuǎn)錄延伸因子存在相互作用的事實,提示UL25蛋白在核內(nèi)參與了某些未知的功能作用,氨基端可能是其與不同蛋白相互作用的重要區(qū)域。
[Abstract]:Herpes simplex virus type I (Herpes Simplex Virus 1) is a common pathogen, and human is its only natural host. The virus infects the host through damaged skin and mucous membranes, proliferates in the epithelium, further invades neurons from the nerve terminals of the infected epithelium, and after initial infection in the trigeminal ganglion, Latent infection with lifetime in the dorsal root ganglion and other sites is established. HSV-1 UL25 gene encodes an important viral capsid protein located near the apical angle of the outer surface of the capsid. At present, it has been found that this protein is involved in many important biological processes of virus infection, including virus transport, proliferation, assembly and so on. Using yeast two-hybrid screening, we found that UL25 interacts with different structural and functional proteins of host cells, one of which is the interaction with cytoskeletal tubulin. The analysis of galactosidase activity showed that the interaction between galactosidase and galactosidase was specific. UL25 was recombined into green fluorescent report vector pEGFP-N2 and the constructed UL25-EGFP fusion protein was analyzed by intracellular fluorescence analysis. The results showed that UL25 was distributed in the cytoplasm and co-located with the cytoskeletal tubulin stained by immunofluorescence. Further using colchicine to destroy the microtubule structure of cytoskeleton, it was found that the distribution of UL25 and the disordered tubulin also basically coincided with each other, indicating that there was a clear interaction between the two proteins in space. Because HSV virus moves along the cytoskeleton microtubules in infected cells, based on the above two-hybrid experiments and fluorescence analysis, it is speculated that UL25 may play an important role in the transport of virus capsid cells. The results showed that UL25 135-353aa and its carboxyl terminal 360-580aa were similar to UL25 protein, while UL25 amino-terminal 140aa was located in cytoplasm and tubulin. They are also located in the nucleus. In combination with yeast two-hybrid experiments, the fact that UL25 interacted with intracellular transcription regulatory proteins such as transcriptional extenders suggests that UL25 proteins are involved in some unknown functions in the nucleus. The amino terminal may be an important region of its interaction with different proteins.
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2303142