【摘要】：[背景] 亞健康狀態(tài)(sub-health status)是介于健康與疾病之間的一種中間狀態(tài),主要表現(xiàn)為活力、反應(yīng)能力降低,適應(yīng)能力減退,但無明確的疾病診斷。亞健康的臨床表現(xiàn)復(fù)雜,涉及到軀體、心理、社會(huì)多個(gè)方面的內(nèi)容,其中常見臨床表現(xiàn)有疲乏無力、頭暈頭昏、心悸胸悶、睡眠紊亂、食欲不振、易于感冒、情緒低落、注意力下降、煩躁易怒、人際關(guān)系緊張等。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,亞健康人群的現(xiàn)患率在60%-70%,亞健康已嚴(yán)重影響人們的工作能力和生存質(zhì)量,給人們的健康生活帶來極大危害。探討亞健康的發(fā)生機(jī)制,有效防治亞健康,成為醫(yī)學(xué)界亟待解決的問題。調(diào)查結(jié)果顯示疲勞是亞健康狀態(tài)的常見臨床表現(xiàn),疲勞型亞健康是亞健康的主要類型之一,因此研究疲勞型亞健康的發(fā)生機(jī)制,積極干預(yù)疲勞型亞健康,應(yīng)做為亞健康研究與防治的重中之重。 免疫系統(tǒng)是機(jī)體重要的防御系統(tǒng),免疫系統(tǒng)的功能與人類健康息息相關(guān),如炎癥,感染,腫瘤,衰老,生殖等人類絕大多數(shù)疾病的發(fā)病機(jī)理都涉及到免疫功能。研究表明疲勞型亞健康發(fā)生的相關(guān)因素超負(fù)荷工作、心理壓力過大、熬夜、生活不規(guī)律等可以導(dǎo)致機(jī)體的免疫功能異常,因此有必要從免疫功能角度探討疲勞型亞健康的發(fā)生與免疫功能的關(guān)系。 動(dòng)物模型作為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中的一個(gè)極為重要的實(shí)驗(yàn)方法和手段,具有可控性好、結(jié)果易獲得、容易復(fù)制等優(yōu)點(diǎn)。研究建立理想、公認(rèn)的疲勞型亞健康動(dòng)物模型對(duì)研究疲勞型亞健康的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律及其防治措施的制定有重要意義。本課題組利用強(qiáng)迫負(fù)5%體重力竭游泳復(fù)合剝奪睡眠20h的方法已制備出疲勞型亞健康的大鼠模型,但該模型仍不是一個(gè)理想的疲勞型亞健康模型,需待進(jìn)一步改進(jìn)。由于目前亞健康的發(fā)生機(jī)制仍不清楚,亞健康的治療也缺乏明確有效的手段。中醫(yī)學(xué)以辨證論治和整體觀念為核心思想,在亞健康防治方面有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明,維康顆粒在干預(yù)疲勞型亞健康方面有確切療效,但其具體藥理機(jī)制尚未完全明確。為此,本研究通過模擬疲勞型亞健康形成相關(guān)因素制備疲勞型亞健康的小鼠模型,并運(yùn)用相關(guān)免疫技術(shù)重點(diǎn)探討疲勞型亞健康與免疫功能之間的關(guān)系及維康顆粒干預(yù)對(duì)模型小鼠免疫功能的影響。本課題主要分為兩個(gè)部分： 一、疲勞型亞健康小鼠模型的創(chuàng)建。通過強(qiáng)迫小鼠水中站立的造模方式,造成造模小鼠的身心疲勞、心理應(yīng)激、生物節(jié)律紊亂,以模擬疲勞型亞健康的形成因素,并根據(jù)小鼠行為學(xué)表現(xiàn)、疲勞程度、生化及各器官病理組織切片等指標(biāo)對(duì)疲勞型亞健康小鼠模型進(jìn)行界定和優(yōu)效性評(píng)價(jià)。 二、維康顆粒對(duì)疲勞型亞健康小鼠免疫功能的影響。觀察維康顆粒對(duì)疲勞型亞健康的療效,利用免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)分析疲勞型亞健康小鼠以及維康顆粒干預(yù)后小鼠的免疫功能變化。 [目的] 建立和評(píng)估疲勞型亞健康小鼠模型；從免疫功能角度,初步探討疲勞型亞健康的發(fā)生機(jī)制,及維康顆粒干預(yù)對(duì)模型小鼠免疫功能的影響,為疲勞型亞健康病理機(jī)制及維康顆粒對(duì)其作用機(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)。 [方法] 第一部分疲勞型亞健康小鼠模型的創(chuàng)建 實(shí)驗(yàn)一：疲勞型亞健康小鼠模型造模方式研究 SPF級(jí)健康雄性KM小鼠40只,隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、造模6h組、造模8h組、造模10h組,每組10只,5只／盒。模型各組小鼠采用強(qiáng)迫小鼠水中站立的方式制備疲勞型小鼠模型。具體方法：每日上午9：00,將模型各組小鼠放入水深為0.8cm、大小為29cm×18cm×15cm的塑料盒內(nèi),并于當(dāng)天下午15：00(6h組)、17：00(8h組)、19：00(10h組)分別將模型各組小鼠從水盒中拿出,正常飼養(yǎng)；正常對(duì)照組：不給予任何刺激,自由飲食。實(shí)驗(yàn)共21天,每3天負(fù)7%體重力竭游泳一次,記錄游泳時(shí)間,測(cè)定其疲勞程度。(注：本實(shí)驗(yàn)以力竭游泳時(shí)間評(píng)估小鼠疲勞程度。方法：將7%自身重量的鉛墜系于小鼠尾部,而后將負(fù)重小鼠放入水溫25℃的水桶中進(jìn)行力竭游泳測(cè)試,力竭游泳標(biāo)準(zhǔn)為小鼠鼻尖沉入水下10s)。實(shí)驗(yàn)過程中觀察各組小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食、二便以及爪、鼻唇、耳等色澤等外觀行為變化。 實(shí)驗(yàn)二：疲勞型亞健康小鼠模型造模時(shí)間研究 SPF級(jí)健康雄性KM小鼠150只,隨機(jī)分為15組：模型0d游泳組、模型5d力竭游泳組、模型9d力竭游泳組、模型12d力竭游泳組、模型16d力竭游泳組；正常0d力竭游泳組、正常5d力竭游泳組、正常9d力竭游泳組、正常12d力竭游泳組、正常16d力竭游泳組；模型5d生化組、模型9d生化組、模型12d生化組、模型16d生化組和正常生化組。模型組采用實(shí)驗(yàn)一中確定的造模強(qiáng)度對(duì)模型各組進(jìn)行造模。在各組小鼠實(shí)驗(yàn)造模結(jié)束后,力竭游泳組7%負(fù)重力竭游泳,測(cè)定其疲勞程度；生化組不需力竭游泳,僅眼眶取血檢測(cè)血生化、血常規(guī),并對(duì)各臟器組織做病理切片檢查。實(shí)驗(yàn)過程中觀察各組小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食、二便以及爪、鼻唇、耳等色澤等外觀行為變化。 實(shí)驗(yàn)三：疲勞型亞健康小鼠模型的評(píng)價(jià) SPF級(jí)健康雄性KM小鼠40只,隨機(jī)分為4組：正常組、模型組、模型自然恢復(fù)7d組、模型自然恢復(fù)14d。后三組按照實(shí)驗(yàn)一、二的中確立的亞健康造模強(qiáng)度與時(shí)間,制備疲勞型亞健康模型。分別于造模結(jié)束后第2d、8d、15d對(duì)正常組及模型組、模型自然恢復(fù)7d、14d組進(jìn)行7%負(fù)重力竭游泳,測(cè)定其疲勞及疲勞恢復(fù)程度；實(shí)驗(yàn)過程中觀察各組小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食、二便以及爪、鼻唇、耳等色澤等外觀行為變化。 第二部分維康顆粒對(duì)疲勞型亞健康小鼠免疫功能的影響 SPF級(jí)健康雄性KM小鼠120只,隨機(jī)分為6組：維康顆粒高劑量組、維康顆粒中劑量組、維康顆粒低劑量組、模型組、模型自然恢復(fù)組、正常對(duì)照組。每組下設(shè)為兩小組,分別用于力竭游泳及免疫功能檢測(cè),每小組小鼠10只。前五組按第一部分實(shí)驗(yàn)中確定的亞健康造模方式制備疲勞型亞健康模型后,維康顆粒高劑量組、維康顆粒中劑量組、維康顆粒低劑量組、模型自然恢復(fù)組分別給予維康顆粒高、中、低劑量水溶液、生理鹽水1ml灌胃,連續(xù)7d；正常對(duì)照組不作處理,自由飲食。實(shí)驗(yàn)過程中觀察各組小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食、二便以及爪、鼻唇、耳等色澤等外觀行為變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后分別檢測(cè)小鼠的力竭游泳時(shí)間和小鼠脾臟及胸腺指數(shù)、T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)能力。 [結(jié)果] 第一部分疲勞型亞健康小鼠模型的制備 實(shí)驗(yàn)一：與正常組相比,造模10h組小鼠活動(dòng)能力、反應(yīng)能力均有顯著下降；8h組活動(dòng)能力、反應(yīng)能力隨造模時(shí)間延長(zhǎng)有所下降；6h組活動(dòng)能力、反應(yīng)能力變化不明顯。隨造模天數(shù)延長(zhǎng),各造模小鼠力竭游泳時(shí)間呈下降趨勢(shì),其中造模10h組小鼠游泳時(shí)間下降趨勢(shì)急速,造模第3d,與實(shí)驗(yàn)開始前比較即有顯著差異(P0.05)。造模6h下降趨勢(shì)平緩,第12d以后力竭游泳時(shí)間始較0d有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。造模8h組,小鼠力竭游泳時(shí)間下降速率介于6h、10d之間,實(shí)驗(yàn)第3d較實(shí)驗(yàn)前有顯著差異(P0.05),之后力竭游泳呈平穩(wěn)下降趨勢(shì)。正常對(duì)照組,小鼠力竭游泳時(shí)間變化不明顯。造模強(qiáng)度和造模天數(shù)的交互效應(yīng)顯著(F=43.021,P=0.000)。 實(shí)驗(yàn)二：與正常組比較,造模9d組,全身皮毛有浸濕現(xiàn)象,皮毛灰暗欠光澤,遺留水盒污漬,逃避反應(yīng)降低,小鼠體重下降不明顯；模型5d、9d、12d、16d組與正常各時(shí)間組比較,游泳時(shí)間顯著下降,P=0.000。血生化示,造模各組小鼠在BUN、ALT、AST、TG水平上存在差異,且其升高或降低幅度與造模天數(shù)有關(guān),按其變化幅度從大到小排序,依次為模型16d、12d組、9d組、5d組。其中模型16d組BUN、ALT、AST水平顯著升高,TG顯著降低,與正常組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；模型12d、9d、5d組各項(xiàng)血生化改變?cè)谡７秶鷥?nèi),與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中模型12d組指標(biāo)變化幅度僅次于16d組,與正常組比較有潛在差異性趨向；模型5d組各指標(biāo)變化最不明顯,與正常組水平相近；模型9d組指標(biāo)變化介于12d與5d之間,BUN、ALT、AST、TG在正常范圍內(nèi)輕度升高或降低。各組血常規(guī)及病理切片結(jié)果示未見明顯異常。 實(shí)驗(yàn)三：根據(jù)實(shí)驗(yàn)一、二的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用強(qiáng)迫小鼠每天水中站立8h,連續(xù)9d的造模方式,制備的小鼠的疲勞型亞健康模型,其力竭游泳時(shí)間明顯下降,小鼠明顯疲勞；去除造模因素,休息恢復(fù)7d后疲勞程度雖有所減輕,但與正常組比較,仍未恢復(fù)到正常程度(與正常組比較,P0.05),至恢復(fù)14d后,小鼠力竭游泳時(shí)間與正常組比較無顯著性差異(P0.05)。 第二部分維康顆粒對(duì)疲勞型亞健康小鼠免疫功能的影響 與模型組比較,維康顆粒各干預(yù)組及模型自然恢復(fù)組,力竭游泳時(shí)間顯著增加(P0.05),且維康顆粒各干預(yù)組力竭游泳時(shí)間高于模型自然恢復(fù)組(P0.05),其中維康顆粒高、中劑量組力竭游泳時(shí)間恢復(fù)最高,與正常組比較無顯著性差異(P0.05)。模型組胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)較正常組明顯減小(P0.05),經(jīng)維康顆粒干預(yù)及自然恢復(fù)后小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)有恢復(fù)趨勢(shì),其中維康顆粒高劑量組恢復(fù)水平最高,維康顆粒高、中劑量組與正常組比較無顯著性差異(P0.05)。T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)結(jié)果顯示,模型組T、B淋巴細(xì)胞經(jīng)ConA/LPS刺激后刺激指數(shù)明顯降低(與正常組比較,P0.05)；經(jīng)維康顆粒干預(yù)或自然恢復(fù)后的小鼠OD值及刺激指數(shù)有增加趨勢(shì),其中維康顆粒高劑量組最為顯著,基本恢復(fù)到正常水平,其OD值及刺激指數(shù)與正常組無明顯差異(P0.05)。 [結(jié)論] 一、本研究最終確立采用強(qiáng)迫小鼠水站立8h,連續(xù)9d,以模擬過勞、心理應(yīng)激、生物節(jié)律紊亂等疲勞型亞健康形成相關(guān)因素的造模方式,可成功制備疲勞型亞健康小鼠模型；模型評(píng)價(jià)表明該模型的穩(wěn)定性、重復(fù)性較好。這為疲勞型亞健康病理機(jī)制的研究及相關(guān)藥物的篩選提供了技術(shù)平臺(tái)。 二、疲勞型亞健康狀態(tài)下小鼠存在免疫功能紊亂的情況,疲勞型亞健康的發(fā)生可能與免疫功能異常存在一定的聯(lián)系。 三、疲勞型亞健康狀態(tài)小鼠在去除造模因素14d后,可恢復(fù)至正常狀態(tài),提示疲勞型亞健康狀態(tài)可以向正常狀態(tài)轉(zhuǎn)化。 四、維康顆粒干預(yù)疲勞型亞健康的效果優(yōu)于自然恢復(fù)組。維康顆�？擅黠@緩解模型小鼠疲勞,延長(zhǎng)其力竭游泳時(shí)間,縮短模型小鼠向正常狀態(tài)恢復(fù)的時(shí)間。此外,維康顆粒還可調(diào)節(jié)疲勞型亞健康小鼠的免疫功能狀態(tài),促進(jìn)其向正常狀態(tài)轉(zhuǎn)變,這可能是維康顆粒發(fā)揮糾正疲勞型亞健康狀態(tài)的作用機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2295779