發(fā)布時(shí)間：2018-10-19 20:24

【摘要】： 蛋白酶體是蛋白質(zhì)降解途徑中的一種重要成分。蛋白酶體降解途徑對(duì)于許多細(xì)胞進(jìn)程,包括細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡及免疫反應(yīng)等都是必不可少的。其功能改變將引起蛋白代謝異常,導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂。REG是一種蛋白酶體激活因子,它能特異性結(jié)合并活化20S蛋白酶體,以ATP和泛素非依賴途徑降解目的蛋白。目前發(fā)現(xiàn)此家族有三個(gè)成員：即REGa.REGβ和REGγ。REGγ是由7個(gè)28KD的亞基形成的同源七聚體,能激活蛋白酶體的活性。 癌癥是目前人類的頭號(hào)殺手,而大腸癌、肺癌及甲狀腺癌是目前癌癥死因的幾種重要類型。癌癥的發(fā)病機(jī)理很復(fù)雜,但究其原因主要在于細(xì)胞周期失控和細(xì)胞惡性增長(zhǎng)。之前研究顯示：p53是細(xì)胞內(nèi)重要的抑癌基因,它也是細(xì)胞增殖、分化和凋亡的一個(gè)樞紐,p53突變或者降解都會(huì)導(dǎo)致其功能失調(diào),使細(xì)胞及其后代的基因組受到嚴(yán)重?fù)p害,引發(fā)惡性腫瘤。p21是p53下游的靶基因,它和p53共同構(gòu)成細(xì)胞周期G1期的檢查站,DNA損傷后不經(jīng)過修復(fù)則無(wú)法通過,減少受損DNA的復(fù)制和積累,從而發(fā)揮抑癌作用。p21是細(xì)胞周期抑制蛋白,可導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)停滯,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。而本實(shí)驗(yàn)室目前研究發(fā)現(xiàn)：REGγ能促進(jìn)MDM2介導(dǎo)的P53降解,而且REGγ能介導(dǎo)蛋白酶體對(duì)p21的降解。由此表明,REGγ與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。但是至今為止,REGγ在癌癥發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制還不是非常清楚。因此,本文我們采用9種小鼠組織、兩種人正常組織和三種典型的人類癌癥組織作為研究對(duì)象,來探討REGγ在各種正常組織和癌癥組織中的表達(dá)和分布情況,并且探究其作用機(jī)理。本文的研究能夠?yàn)橐院蟀┌Y的治療提供理論依據(jù)。 本文主要采用免疫組織化學(xué)的方法,對(duì)REGγ在9種小鼠組織的表達(dá)分布進(jìn)行系統(tǒng)研究,同時(shí)通過比較REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌中和正常人組織中的表達(dá)差異,揭示REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。最后,本文還用免疫組化的方法檢測(cè)了REGγ+/+和REGγ-/-小鼠組織中p53、p21和MDM2的分布,并和REGγ的表達(dá)做相關(guān)性分析,初步探索REGγ的作用機(jī)理。另外,我們還采用熒光素酶方法,通過體外實(shí)驗(yàn)探討了REGγ可能的作用機(jī)制。 結(jié)果發(fā)現(xiàn),在正常的生理分布方面,REGγ在小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)中均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。其中神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)陽(yáng)性表達(dá)率最高。特別是小腦的浦肯野細(xì)胞和視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有特異表達(dá)。這提示REGγ可能參與細(xì)胞的生長(zhǎng)及細(xì)胞周期的調(diào)控。同時(shí),相對(duì)于正常癌旁組織,REGγ在大腸癌,肺癌和甲狀腺癌組織中呈現(xiàn)明顯的高表達(dá)。所以REGγ可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。在進(jìn)一步的機(jī)理探究中,我們通過比較REGγ+/+和REGγ-/-小鼠中p53、p21、MDM2的表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)REGγ能夠減少各種小鼠組織中細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白p53和p21的表達(dá),促進(jìn)MDM2蛋白的表達(dá)。因此我們推測(cè)：REGγ對(duì)癌癥的作用可能是通過降解p53或p21的降解來實(shí)現(xiàn),其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步的探索。抑制人類癌細(xì)胞的內(nèi)源性REGγ蛋白就能夠減少M(fèi)DM2介導(dǎo)的p53降解,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,因此REGγ有望于成為癌癥治療的一個(gè)新的靶蛋白。
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【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R341;R73-3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2282262