發(fā)布時(shí)間：2018-10-10 10:05

【摘要】： 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?雙歧桿菌是人和動(dòng)物腸道內(nèi)重要的生理菌,其表面分子脂磷壁酸(Lipoteichoic acid ,LTA)已被證實(shí)具有抗氧化的作用,能夠有效延緩衰老,但其機(jī)制并不是很清楚。本研究用H2O2誘導(dǎo)人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38出現(xiàn)“應(yīng)激誘導(dǎo)早熟性老化”(stress-induced premature senescence,SIPS),觀察雙歧桿菌LTA是否具有對抗H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的作用,以及WI-38細(xì)胞中p21、CDK2和cyclin E mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化,初步探討雙歧桿菌LTA抗細(xì)胞衰老的細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 1.采用噻唑蘭比色(MTT)法檢測經(jīng)雙歧桿菌LTA處理前后,人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38生存率影響的變化;用亞致死量的H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞衰老,β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色檢測衰老細(xì)胞,計(jì)算其陽性百分率并檢測經(jīng)雙歧桿菌LTA處理前后對β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色陽性百分率的變化。 2.雙歧桿菌LTA體外作用人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38后,用RT-PCR檢測衰老相關(guān)指標(biāo)p21、cyclin E和CDK2的mRNA水平變化,Western blot分析p21、cyclin E和CDK2蛋白水平的變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.經(jīng)雙歧桿菌LTA作用后,人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38的生存率增高并且β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色陽性率降低。 2.經(jīng)雙歧桿菌LTA作用后,WI-38細(xì)胞中與衰老相關(guān)的p21的mRNA及蛋白表達(dá)水平下降;cyclin E和CDK2的mRNA及蛋白表達(dá)水平升高。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 1.雙歧桿菌LTA能抑制H2O2對WI-38細(xì)胞氧化損傷作用,抑制H2O2對WI-38細(xì)胞誘導(dǎo)衰老的作用。 2.雙歧桿菌LTA能明顯下調(diào)WI-38細(xì)胞中p21的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá);上調(diào)WI-38細(xì)胞中cyclin E和CDK2的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
[Abstract]:Objective Bifidobacterium is an important physiological bacterium in human and animal intestinal tract. Its surface molecule (Lipoteichoic acid has been proved to have antioxidant effect and can effectively delay senescence, but its mechanism is not very clear. In this study, H2O2 was used to induce human embryonic lung diploid fibroblasts (WI-38) to appear "stress-induced premature aging" (stress-induced premature senescence,SIPS). Whether the bifidobacterium LTA could antagonize the senescence induced by H2O2 was observed. The changes of expression of p21 CDK2, cyclin E mRNA and protein in WI-38 cells were also studied to explore the cell cycle regulation mechanism of bifidobacterium LTA against cell senescence. Experimental method 1. The changes of WI-38 survival rate of human embryonic lung diploid fibroblasts treated with bifidobacterium LTA were detected by thiazolam colorimetric (MTT) assay, the senescence of cells was induced by sublethal H2O2, and the aging cells were detected by 尾 -galactosidase cytochemical staining. The positive percentage of 尾 -galactosidase was calculated and the changes of 尾 -galactosidase cytochemical staining were detected before and after treatment with Bifidobacterium LTA. 2. Bifidobacterium LTA was used to detect the mRNA levels of p21 cyclin E and CDK2 in human embryonic lung diploid fibroblasts treated with WI-38 in vitro. Western blot was used to analyze the changes of p21 cyclin E and CDK2 protein levels. Experimental results 1. After treated with Bifidobacterium LTA, the survival rate of human embryonic lung diploid fibroblasts increased and the positive rate of 尾 -galactosidase cytochemical staining decreased. 2. The expression level of mRNA and protein of senescence related p21 in WI-38 cells was decreased after treatment with bifidobacterium LTA. The expression of mRNA and protein of cyclin E and CDK2 was increased. Conclusion 1. Bifidobacterium LTA inhibited the oxidative damage of H2O2 to WI-38 cells and the senescence of WI-38 cells induced by H2O2. 2. Bifidobacterium LTA could significantly down-regulate the expression of p21 mRNA and protein in WI-38 cells, and up-regulate the mRNA and protein expression of cyclin E and CDK2 in WI-38 cells.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R371

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王春耀;張德純;;雙歧桿菌脂磷壁酸抗衰老的研究現(xiàn)狀[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年03期

2 鄧一平,王躍,胡宏;雙歧桿菌及表面分子對胃粘膜糖蛋白的粘附作用[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2000年04期

3 蔣虹!400016,胡宏!400016;雙歧桿菌表面分子誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞分化的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年02期

4 藍(lán)景剛,胡宏;雙歧桿菌及其表面分子的免疫增強(qiáng)作用[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;1999年03期

5 王躍;付玉榮;劉明方;陳淑惠;;雙歧桿菌脂磷壁酸抗免疫衰老的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2006年03期

6 張宏娟;王躍;劉明方;陳淑惠;;雙歧桿菌脂磷壁酸對D-半乳糖致衰老小鼠表型的影響[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2008年03期

7 劉春梅;魏華;郭亮;萬翠香;;雙歧桿菌脂磷壁酸生物學(xué)活性研究進(jìn)展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2007年05期

8 侯任窮;李玉濤;張宇;劉寧;;納米四氧化三鐵雙歧桿菌LTA對實(shí)驗(yàn)性胃癌增殖及凋亡的影響[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2008年05期

9 藍(lán)景剛,胡宏,康格非;雙歧桿菌及其表面分子對MNNG致小鼠腸粘膜細(xì)胞DNA損傷的抑制作用[J];癌變畸變突變;1998年01期

10 藍(lán)景剛,胡宏,康格非;雙歧桿菌及其表面分子對MNNG誘導(dǎo)SOS反應(yīng)的抑制作用[J];癌變畸變突變;1998年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 謝寧;郭斌;王躍;;雙歧桿菌脂磷壁酸增強(qiáng)化療藥物抗肝癌細(xì)胞的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 程茜;聶晶;;雙歧桿菌及其WPG對臍血來源DC分化成熟的影響[A];第六屆全國兒科微生態(tài)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨兒科微生態(tài)學(xué)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2008年

3 熊菲;程茜;;雙歧桿菌對單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第九次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

4 黃鴻眉;程茜;;雙歧桿菌對輪狀病毒感染腸上皮細(xì)胞IL-8、TNF-α分泌的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

5 斯大勇;張日俊;;乳酸菌粘附的機(jī)制、特點(diǎn)、生物學(xué)作用[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（上冊）[C];2008年

6 劉麗達(dá);倪學(xué)勤;曾東;;雙歧桿菌植酸酶的研究進(jìn)展[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（上冊）[C];2008年

7 管曉冉;張德純;李金玲;席青;;雙歧桿菌發(fā)酵果蔬汁對小鼠免疫功能的影響[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會2010年論文集[C];2011年

8 程茜;黃鴻眉;;雙歧桿菌抑制輪狀病毒感染腸上皮細(xì)胞IL-8、TNF-α分泌的研究[A];第六屆全國兒科微生態(tài)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨兒科微生態(tài)學(xué)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2008年

9 龐小燕;趙立平;;基于屬特異性PCR基礎(chǔ)上的TGGE和克隆文庫方法分析人糞便中雙歧桿菌的組成[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動(dòng)物微生態(tài)學(xué)分會第三屆第七次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 袁靜;王恒梁;黃留玉;;雙歧桿菌體內(nèi)體外的比較蛋白質(zhì)組和比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;在這里 生命將會出現(xiàn)奇跡[N];科技日報(bào);2000年

2 山東龍力生物科技股份有限公司;低聚木糖與微生態(tài)、雙歧桿菌及人體健康[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2003年

3 何德功;日本研究出用雙歧桿菌治療癌癥的技術(shù)[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 北京軍區(qū)總醫(yī)院營養(yǎng)科 魏文青;益生菌——腸道清道夫[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

5 嚴(yán)雙紅;保健從腸道開始[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

6 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會微生態(tài)學(xué)分會副主任委員《中國微生態(tài)學(xué)雜志》副主編 楊景云 教授;龍拱雙歧因子制劑——奉獻(xiàn)給二十一世紀(jì)人類的健康[N];科技日報(bào);2000年

7 譚醫(yī)生;調(diào)節(jié)腸胃,從寶寶開始[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 山東龍力生物科技有限公司;雙歧桿菌在腸道微生態(tài)中的地位[N];中國食品報(bào);2009年

9 ;低聚果糖的發(fā)展歷程[N];消費(fèi)日報(bào);2007年

10 比利時(shí)新魯汶天主教大學(xué) 瑪塞爾·羅伯弗勞德(Marcel Roberfroid) 陳曉林 馬志民 譯;益生元發(fā)展中尚待解決的問題[N];中國食品報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李青青;耐氧性雙歧桿菌的篩選及其生理特性與應(yīng)用研究[D];浙江大學(xué);2010年

2 鄒強(qiáng);雙歧桿菌微膠囊的研究[D];江南大學(xué);2012年

3 許飛利;我國食品工業(yè)常用益生乳酸菌菌種分型與溯源數(shù)據(jù)庫的研究[D];江南大學(xué);2011年

4 姚君;攜帶hIL-10基因的雙歧桿菌治療小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的研究[D];暨南大學(xué);2011年

5 孟祥晨;雙歧桿菌生理功能特性及其應(yīng)用的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

6 李平蘭;長壽老人源雙歧桿菌優(yōu)良菌株的篩選及生理功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

7 付艷茹;嬰兒雙歧桿菌完整肽聚糖生產(chǎn)工藝及其抗腫瘤作用機(jī)理的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 鐘世順;雙歧桿菌分泌型粘附素體外調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞生物學(xué)功能的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 龍若庭;胃泌素調(diào)節(jié)激素（OXM）在雙歧桿菌中的表達(dá)及其轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌對肥胖小鼠食量、體重的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

10 王國興;雙歧桿菌胞壁蛋白誘導(dǎo)人腸腺上皮細(xì)胞β-防御素-2基因表達(dá)及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[D];四川大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 謝寧;雙歧桿菌脂磷壁酸聯(lián)合5-氟尿嘧啶抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

2 李芙蓉;雙歧桿菌脂磷壁酸對B16荷瘤小鼠NK細(xì)胞受體和Fas/FasL表達(dá)的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

3 鄒芳勤;雙歧桿菌抑制因素研究和動(dòng)力學(xué)模型建立[D];江南大學(xué);2004年

4 陳玉梅;雙歧桿菌完整肽聚糖治療食物過敏小鼠及對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 趙學(xué)敏;化療藥物對血液腫瘤患兒腸道菌群影響及微生態(tài)調(diào)節(jié)劑干預(yù)作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

6 張莉滟;雙歧桿菌與乳桿菌原生質(zhì)體融合的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

7 于靜;用PCR法快速定量人類糞便中雙歧桿菌的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2004年

8 黎永學(xué);雙歧桿菌和釀酒酵母原生質(zhì)體融合的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

9 包海泉;益生菌制劑對家畜免疫促進(jìn)作用的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 徐廣超;豆渣可溶性膳食纖維的制備及功能性的研究[D];江南大學(xué);2005年

，

本文編號：2261371