【摘要】： 目的研究日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)不同期蟲體經(jīng)化學(xué)裂解所獲得的蛋白組分及其抗原特性,為篩選出對于血吸蟲病的流行病學(xué)調(diào)查研究、預(yù)防及診治具有應(yīng)用價值的抗原分子提供理論依據(jù)。探尋酶消化法收集純化蟲卵的適宜條件,使所獲蟲卵純度高,結(jié)構(gòu)相對完整,以便于進一步對其進行生物學(xué)特性的研究。 方法以低溫(4℃)處理雌雄蟲減弱其動力方法分離雌、雄蟲,以反復(fù)凍融(-30℃)方法處理雌蟲盡可能除去其體內(nèi)的蟲卵,用化學(xué)裂解的方法制備日本血吸蟲尾蚴、成蟲(雌蟲和雄蟲)以及蟲卵中的可溶性蛋白抗原,用十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PAGE)對不同期蟲體蛋白組分的相對分子量大小及分布范圍進行分析;以感染后不同時間的兔血清和免疫印跡試驗(Western blotting)方法,對不同期蟲體蛋白組分的抗原特性進行免疫分析;利用反復(fù)過篩結(jié)合胰酶消化后離心沉淀純化收集血吸蟲卵,并和漂浮法純化蟲卵進行比較分析。結(jié)果(1)日本血吸蟲的不同蟲期蛋白組分:蟲卵52條帶,其涉及的分子量范圍極廣,主要在61.0kD～97kD、19.0kD～35.1kD兩大區(qū)間,尤其在19.0kD～35.1kD區(qū)間處的蛋白分子含量極為豐富;其次是雄蟲48條帶,其分子量分布范圍主要為84.2kD～97.2kD、61.0kD～76.8kD、48.4kD～55.6kD、27.8kD～35.1kD;雌蟲40條帶,其分子量主要分布范圍分別為25.6kD～27.6kD、27.8k D～35.1kD、61.0kD～67.2kD,而尾蚴蛋白組分最少(約6條)其相對分子量分別為146kD、121kD、78.1kD、66.8kD、55.6kD、36.6kD。 (2)可溶性尾蚴抗原(SCA)中78.1kD分子在與感染后6周兔血清免疫反應(yīng)最強;雄蟲可溶性抗原(AWA-m)中的58.5kD、55.8kD、33.6～39.8kD分子與感染兔血清隨時間延長印跡反應(yīng)增強;雌蟲可溶性抗原(AWA-f)中的55.8kD和26.1～33.3kD分子印跡反應(yīng)也是逐步增強;蟲卵SEA出現(xiàn)的免疫反應(yīng)的分子為109.5kD、105.0kD、78.1～88.7kD、68.9kD、36.6kD、27.3kD ,量多且逐步增強。 (3)酶消化法在適宜條件(37℃、0.25%胰酶、適當振搖)下,所收集純化的蟲卵結(jié)構(gòu)完整,得率高,純度可達99%以上。 結(jié)論血吸蟲蟲體用化學(xué)裂解所獲得的可溶性蛋白經(jīng)SDS-PAGE顯示:不同蟲期、不同性別的蟲體,其蛋白組分具有差異性;免疫印跡結(jié)果表明:日本血吸蟲的SCA中78.1kD分子,AWA中的58.5kD、55.8kD、26.1～33.3kD、33.6～39.8kD分子,SEA中的相對分子量為109.5kD、105.0kD、78.1～88.7kD、68.9kD、36.6kD、27.3kD可能具有潛在的用于診斷和防治血吸蟲病的價值;酶消化法與漂浮法收集純化的血吸蟲卵的比較結(jié)果提示:酶消化法純化血吸蟲卵效果理想,更利于人們對血吸蟲卵的特性進行深入研究。
[Abstract]:Objective to study the protein components and antigens obtained from the chemical cleavage of Schistosoma japonicum (Schistosoma japonicum) at different stages in order to screen out the epidemiological investigation of schistosomiasis. Prevention, diagnosis and treatment of antigenic molecules of practical value to provide theoretical basis. To explore the suitable conditions for the collection and purification of eggs by enzyme digestion, the obtained eggs are of high purity and relatively complete structure, so as to further study the biological characteristics of the eggs. Methods female and male females were separated by low temperature (4 鈩，

本文編號：2248368