發(fā)布時間：2018-09-14 19:07

【摘要】：目的對人源中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)進行原核表達、純化,并驗證其免疫學活性。方法通過化學合成法合成人源NGAL成熟肽c DNA序列,構建原核表達載體p Cold-NGAL,轉化至E.coli BL21(DE3)plys S中。摸索p Cold-NGAL最佳誘導條件,表達并純化重組蛋白;使用SDS-PAGE、Western blot法和免疫比濁法鑒定純化后的重組NGAL蛋白的相對分子質量(Mr)和以及與NGAL單克隆抗體(m Ab)的結合活性。結果經(jīng)雙酶切和測序驗證,原核表達載體p Cold-NGAL成功構建。優(yōu)化誘導條件后,重組NGAL蛋白在E.coli BL21(DE3)plys S中以可溶性蛋白形式表達,Mr約為25 000。通過Ni2+親和層析純化獲得高純度重組NGAL蛋白,SDS-PAGE分析其純度高于98.0%。經(jīng)Western blot法和免疫比濁法鑒定,重組NGAL蛋白可與NGAL m Ab特異性結合。結論成功表達和純化了重組NGAL蛋白,并具有免疫學活性。
[Abstract]:Objective to express and purify the human neutrophil gelatinase-associated lipid carrier protein (NGAL) in prokaryotic expression, and to verify its immunological activity. Methods the human NGAL mature peptide c DNA sequence was synthesized by chemical synthesis, and the prokaryotic expression vector p Cold-NGAL, was transformed into E.coli BL21 (DE3) plys S). The recombinant protein was expressed and purified under the optimal induction conditions of p Cold-NGAL, and the relative molecular weight (Mr) and the binding activity of the purified recombinant NGAL protein to NGAL monoclonal antibody (m Ab) were identified by SDS-PAGE,Western blot and immunoturbidimetry. Results the prokaryotic expression vector p Cold-NGAL was successfully constructed by double enzyme digestion and sequencing. After optimizing the induction conditions, the recombinant NGAL protein expressed in E.coli BL21 (DE3) plys S) as a soluble protein was about 25 000. High purity recombinant NGAL protein was purified by Ni2 affinity chromatography and its purity was higher than 98.0 by SDS-PAGE. The recombinant NGAL protein was identified by Western blot and immunoturbidimetry. The recombinant NGAL protein could specifically bind to NGAL m Ab. Conclusion the recombinant NGAL protein was successfully expressed and purified and has immunological activity.
【作者單位】： 廣州萬孚生物技術股份有限公司自檢型快速診斷國家地方聯(lián)合工程實驗室;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃(863)(2011AA02A103) 廣東省戰(zhàn)略新興產(chǎn)業(yè)核心技術攻關項目(2012A080800007)
【分類號】：R392

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2243612