【摘要】：哺乳動物的卵母細胞是一種具有非凡能力的細胞,它不僅能進行減數(shù)分裂將單倍體母源性遺傳物質(zhì)傳遞給子代,而且能夠使合子基因組發(fā)生重編程,啟動并支持早期胚胎的發(fā)育過程。越來越多的研究表明,卵母細胞中儲存的母源蛋白在受精、染色質(zhì)重塑、合子基因組激活、胚胎致密化等過程中都發(fā)揮著極其重要的作用。因此,鑒定和研究卵母細胞中的母源蛋白對于我們認識哺乳動物早期胚胎的發(fā)育過程具有十分重要的意義。在本研究中我們采用更高效更全面的策略對小鼠卵母細胞中的母源蛋白進行研究。 我們首先利用1D SDS-PAGE+LC-MS/MS的技術(shù)路線構(gòu)建小鼠MⅡ期卵母細胞蛋白表達譜。從2700枚去透明帶的小鼠MⅡ期卵母細胞中,我們成功地鑒定到了625種母源蛋白。這是到目前為止最大的小鼠MⅡ期卵細胞蛋白質(zhì)列表。我們將構(gòu)建的卵母細胞蛋白表達譜遞交到國際Proteomics identifications database (PRIDE)數(shù)據(jù)庫。點擊每一個母源蛋白的鏈接,就可以查看到詳細的鑒定信息,包括肽段和譜圖等。該公共數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建為研究母源蛋白與早期胚胎發(fā)育提供很有價值的資源。其次,利用生物信息學(xué)的技術(shù)手段對該蛋白表達譜進行了詳細的分析,篩選到一批可能在早期胚胎發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用的母源蛋白。這些蛋白為進一步尋找在早期胚胎發(fā)育過程中起重要作用的母源效應(yīng)蛋白提供了很好的候選成分。 小鼠MⅡ期的卵母細胞處于第二次減數(shù)分裂中期,在含有細胞松弛素B的氯化鍶激活液的作用下可以發(fā)生孤雌激活,進而發(fā)育至囊胚。為了尋找在這一過程中發(fā)揮重要作用的母源蛋白,我們利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)的經(jīng)典方法2D-PAGE+MALDI-TOF/TOF技術(shù)路線構(gòu)建小鼠MⅡ期卵母細胞孤雌激活前后差異蛋白表達譜。一共鑒定到78個差異蛋白點,對應(yīng)于52種蛋白。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),其中有很多蛋白參與細胞增殖和胚胎發(fā)育的過程,有一些蛋白已經(jīng)被證實參與了染色質(zhì)的重塑過程。因此,這一蛋白列表為研究卵細胞激活機制以及在早期胚胎發(fā)育過程中起重要作用的母源因子提供了很有意義的候選成分。 在構(gòu)建了卵母細胞蛋白表達譜的基礎(chǔ)上,我們挑選了一些母源蛋白進行了初步的功能研究。AnnexinⅦ呈極性顆粒狀分布于卵母細胞染色體對側(cè)質(zhì)膜下,和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成的極性顆粒關(guān)系密切,可能在受精引發(fā)鈣離子震蕩過程中發(fā)揮作用。另外,我們還對ECAT1、OOEP、RBPMS2、TLE6和ZBED3在小鼠卵巢及早期胚胎中的表達和定位進行了探討。 本研究利用互補的策略構(gòu)建了小鼠MⅡ期卵母細胞蛋白表達譜和差異蛋白譜,獲得了對MⅡ期卵母細胞中母源蛋白的全景式認識,為研究母源蛋白的功能以及促進對早期胚胎發(fā)育過程的認識奠定了很好的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Mammalian oocytes are extraordinary cells that not only carry out meiosis to transfer haploid maternal genetic material to their offspring, but also reprogram the zygote genome. Initiate and support the development of early embryos. More and more studies have shown that the mother proteins stored in oocytes play an important role in fertilization chromatin remodeling zygote genome activation and embryo densification. Therefore, the identification and study of the mother proteins in oocytes is very important for us to understand the development of mammalian early embryos. In this study, we used a more efficient and comprehensive strategy to study mouse oocyte derived proteins. We first constructed the oocyte protein expression profile of mouse M 鈪，

本文編號：2218376