【摘要】： 背景:平滑肌細(xì)胞(SMC)的過度增生是血管病變發(fā)生發(fā)展中的重要環(huán)節(jié)。長久以來的觀點(diǎn)認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化(AS)斑塊中的SMC源于中膜SMC的遷移和增生。雖然對于中膜SMC的遷移和增殖的分子機(jī)制做了大量的研究工作,但是至今仍沒有建立有效的阻止閉塞性血管重建的治療方法。然而近年來有報(bào)道,骨髓細(xì)胞參與了血管疾病的發(fā)生,發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)骨髓細(xì)胞可能具有分化成血管祖細(xì)胞的潛能,這種祖細(xì)胞遷移至受損的血管,分化成平滑肌細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞,參與血管的修復(fù),重塑和病變的形成。這些發(fā)現(xiàn)為探索血管疾病的新療法提供了基礎(chǔ)。但是骨髓細(xì)胞向平滑肌方向分化的分子機(jī)制仍不清楚。然而令人興奮的是近年來研究者發(fā)現(xiàn)了一個(gè)關(guān)鍵的促平滑肌分化因子-myocardin。目前對于myocardin的研究仍處于初步階段。 目地:探討血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)及高濃度的胎牛血清(20%FBS)體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)定向分化為平滑肌細(xì)胞的可行性及myocardin在此過程中的表達(dá)變化。 方法:采用全骨髓貼壁分離和消化控制相結(jié)合分離小鼠BMSC,然后用PDGF-BB(50μg/L)聯(lián)合高濃度胎牛血清(20%FBS)誘導(dǎo)BMSC,分別于誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)4天、8天后用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞α-SMA,SM-MHC,myocardin的表達(dá),同時(shí)在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果:從單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)上看,誘導(dǎo)前BMSC呈梭形,分支狀或多邊形,誘導(dǎo)后的細(xì)胞體積略增加,仍以梭形細(xì)胞為主,但是誘導(dǎo)8天時(shí)細(xì)胞密集處出現(xiàn)束狀,漩渦狀排列,與SMC相似。細(xì)胞免疫組化顯示:誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)4天、8天時(shí),α-SMA,SM-MHC,myocardin三種蛋白的表達(dá)逐漸增強(qiáng),平均灰度值逐漸降低,不同時(shí)間點(diǎn)組組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論: PDGF-BB聯(lián)合高濃度的胎牛血清(20%FBS)可有效誘導(dǎo)BMSC向平滑肌樣細(xì)胞分化。myocardin在此分化過程中起重要作用。
[Abstract]:Background: the excessive proliferation of (SMC) in smooth muscle cells is an important link in the development of vascular diseases. It has long been argued that SMC in atherosclerotic (AS) plaques is due to the migration and proliferation of SMC. Although a great deal of research has been done on the molecular mechanism of migration and proliferation of mesenchymal SMC, there is still no effective therapy to prevent occlusive vascular remodeling. However, in recent years, it has been reported that bone marrow cells are involved in the occurrence and development of vascular diseases. It is found that bone marrow cells may have the potential to differentiate into vascular progenitor cells which migrate to damaged blood vessels and differentiate into smooth muscle cells or endothelial cells which are involved in vascular repair remodeling and pathological changes. These findings provide a basis for exploring new therapies for vascular diseases. However, the molecular mechanism of smooth muscle differentiation of bone marrow cells remains unclear. However, it is exciting that in recent years, researchers have discovered a key smooth muscle differentiation factor-myocardinin. At present, the study of myocardin is still in its initial stage. Objective: to investigate the feasibility of platelet-derived growth factor B (PDGF-BB) and high concentration fetal bovine serum (20s) in inducing the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC) into smooth muscle cells in vitro and the changes of myocardin expression during this process. Methods: bone marrow adherent isolation and digestion control were used to isolate mouse BMSC,. BMSC, was induced by PDGF-BB (50 渭 g / L) combined with high concentration fetal bovine serum (20s). The expression of 偽 -SMASM-MHCMHCmyocardin was detected by immunocytochemistry before induction and 4 days and 8 days after induction. At the same time, the morphological changes of cells were observed under inverted phase contrast microscope. Results: from the morphological point of view of single cell, BMSC appeared fusiform, branched or polygon before induction, and the volume of cells increased slightly after induction, but at 8 days after induction, there were bundles and swirls in the dense part of the cells. Similar to SMC. The expression of 偽 -SMASM-MHCMHCmyocardin protein increased and the average gray value decreased before induction and 4 days and 8 days after induction (P0.05). Conclusion: PDGF-BB combined with high concentration of fetal bovine serum (20s) can effectively induce the differentiation of BMSC into smooth muscle cells. Myocardin plays an important role in this process.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R329

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本文編號：2210072