【摘要】： 感染HBV能導(dǎo)致急性、慢性肝炎,與肝硬化及肝細(xì)胞癌有密切關(guān)系。目前,控制HBV感染的有效方法是接種乙肝疫苗�；蛞呙绲呐d起和發(fā)展為乙型肝炎病毒感染的防治提供了新的途徑�；蛞呙缈烧T導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞及體液免疫反應(yīng),特別是誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)的能力優(yōu)于蛋白、多肽類疫苗,在乙型肝炎病毒的清除方面具有較好的應(yīng)用前景,更適應(yīng)于慢性病毒感染的預(yù)防與治療。 核酸疫苗的免疫效果在不同動(dòng)物個(gè)體中差異較大,某些腫瘤及病毒的T、B細(xì)胞表位抗原性弱,難以誘導(dǎo)有效的T、B細(xì)胞免疫應(yīng)答,提高核酸疫苗的免疫效果已成為研究熱點(diǎn)�；蜃魟┦菍⒕幋a某些細(xì)胞因子及T、B細(xì)胞表面共刺激分子等的基因與目的基因克隆于同一載體或不同載體共同免疫動(dòng)物,其表達(dá)的相應(yīng)蛋白可起到佐劑的作用,從而大大增強(qiáng)T、B細(xì)胞的免疫應(yīng)答水平。 LIGHT是TNF配體家族的成員,可以共刺激T細(xì)胞增殖。HVEM是LIGHT介導(dǎo)T細(xì)胞活化的受體,LIGHT通過與HVEM結(jié)合發(fā)揮共刺激作用,參與T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。越來越多的證據(jù)表明LIGHT與其受體的相互作用可作為控制細(xì)胞免疫應(yīng)答的潛在目標(biāo)。 本研究對(duì)小鼠LIGHT作為乙肝核酸疫苗的基因佐劑方面進(jìn)行了初步研究。在克隆小鼠LIGHT基因的基礎(chǔ)上,構(gòu)建其胞外段基因的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)并對(duì)其表達(dá)條件進(jìn)行了初步的探索;構(gòu)建LIGHT全長(zhǎng)基因的真核表達(dá)質(zhì)粒并在體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞,檢測(cè)結(jié)果表明真核表達(dá)質(zhì)粒中的LIGHT基因可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá);混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中LIGHT轉(zhuǎn)染的樹突狀細(xì)胞可顯著增強(qiáng)同種異體T淋巴細(xì)胞增殖;將LIGHT真核表達(dá)質(zhì)粒與乙肝核酸疫苗質(zhì)粒聯(lián)合免疫Balb/c小鼠,細(xì)胞免疫與體液免疫功能檢測(cè)結(jié)果表明LIGHT可以增強(qiáng)小鼠體內(nèi)的特異性免疫應(yīng)答,從而發(fā)揮免疫佐劑的作用。
[Abstract]:Infection with HBV can lead to acute and chronic hepatitis, closely related to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. At present, the effective way to control HBV infection is to inoculate hepatitis B vaccine. The rise and development of gene vaccine provide a new way for the prevention and treatment of hepatitis B virus infection. Gene vaccine can induce cellular and humoral immune response, especially the ability of inducing cellular immune response is superior to that of protein and polypeptide vaccine. More suitable for the prevention and treatment of chronic virus infection. The immune effect of nucleic acid vaccine varies greatly among different animals. The antigenicity of TnB cell epitopes of some tumors and viruses is weak, it is difficult to induce an effective TnB cell immune response, and improving the immune effect of nucleic acid vaccine has become a hot research topic. Gene adjuvant is a kind of gene which encodes some cytokines and costimulatory molecules on the surface of TnB cells and is cloned into the same vector or different vectors to immunize animals. The corresponding protein expressed by the adjuvant can act as an adjuvant. LIGHT is a member of TNF ligand family, which can co-stimulate T cell proliferation. HVEM is the receptor of T cell activation mediated by LIGHT. Participate in T cell proliferation and cytokine production. There is growing evidence that the interaction of LIGHT with its receptors may be a potential target for controlling cellular immune responses. In this study, we studied mouse LIGHT as gene adjuvant of hepatitis B nucleic acid vaccine. On the basis of cloning mouse LIGHT gene, the prokaryotic expression vector of its extracellular segment gene was constructed, and the expression conditions were preliminarily explored in Escherichia coli. The eukaryotic expression plasmid of the full-length LIGHT gene was constructed and transfected into the cells in vitro. The results showed that the LIGHT gene in the eukaryotic expression plasmid could be expressed in mammalian cells. In mixed lymphocyte reaction, dendritic cells transfected with LIGHT could significantly enhance the proliferation of allogeneic T lymphocytes, and Balb/c mice were immunized with LIGHT eukaryotic expression plasmid and hepatitis B nucleic acid vaccine plasmid. The results of cellular and humoral immunity showed that LIGHT could enhance the specific immune response in mice and play the role of immune adjuvant.
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2204529