【摘要】： 將人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16E7基因以pGEX-4T-1和pET-28a(+)為載體,以大腸桿菌Rosetta(DE3)和BL21(λDE3)為原核蛋白表達(dá)系統(tǒng),表達(dá)HPV16E7的蛋白,為蛋白純化的后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ),并為進(jìn)一步為基因診斷檢測(cè)以及疫苗的研究開(kāi)拓前景。根據(jù)GenBank中查詢的HPV16 E7型基因序列(EF422137),人工合成其核苷酸序列,設(shè)計(jì)擴(kuò)增HPV16E7基因的特異性引物,且引物引入EcoRⅠ和BamHⅠ兩個(gè)酶切位點(diǎn),用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增HPV16E7基因片段。通過(guò)pMD18-T質(zhì)粒載體的EcoRⅠ,BamHⅠ雙酶切位點(diǎn)與E7基因片段連接后,構(gòu)建一個(gè)新的重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α,經(jīng)藍(lán)白篩選后提質(zhì)粒,經(jīng)酶切、PCR及測(cè)序等鑒定,初步證實(shí)獲得了HPV16E7基因的重組質(zhì)粒;構(gòu)建pGEX-4T-1-HPV16E7原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,用SDS-PAGE分析電泳產(chǎn)物。SDS-PAGE分析顯示,在分子量大小約40KDa處有一新增蛋白條帶,且與預(yù)期結(jié)果大小一致,表達(dá)豐度適中。并運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)在線預(yù)測(cè)分析HPV16E7基因編碼蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)和二級(jí)結(jié)構(gòu),為進(jìn)一步研究該病毒的功能研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The human papillomavirus (human papillomavirus,HPV) 16E7 gene was expressed with pGEX-4T-1 and pET-28a () as vectors and E. coli Rosetta (DE3) and BL21 (位 DE3) as prokaryotic protein expression systems. It also opens up the prospect for gene diagnosis and vaccine research. According to the HPV16 E7 gene sequence (EF422137) inquiring in GenBank, the nucleotide sequence of HPV16E7 gene was synthesized, and a specific primer was designed to amplify the HPV16E7 gene. The primers were introduced into the EcoR 鈪，

本文編號(hào)：2203151