【摘要】： 目的： 研究華東地區(qū)6個(gè)城市8家醫(yī)院的39株攜帶KPC-2型碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌耐藥特征、分子流行病學(xué)和耐藥基因周圍環(huán)境。 材料與方法： 收集我國6個(gè)城市8家醫(yī)院住院病人2006年3月到2007年12月攜帶KPC基因的腸桿菌科細(xì)菌共39株。采用Etest法測(cè)定其對(duì)十種常用抗菌藥物的最小抑菌濃度值,采用PCR擴(kuò)增和測(cè)序檢測(cè)碳青霉烯酶基因,利用脈沖場凝膠電泳技術(shù)對(duì)菌株間的同源性進(jìn)行分析,通過接合實(shí)驗(yàn)、質(zhì)粒提取、Southern雜交等方法證明耐藥基因位于質(zhì)粒上,構(gòu)建質(zhì)粒DNA文庫、鳥槍法測(cè)序測(cè)定耐藥質(zhì)粒的基因序列并通過生物信息學(xué)方法分析基因結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 所有菌株對(duì)碳青霉烯類抗生素均表現(xiàn)出耐藥或者敏感性降低,脈沖場凝膠電泳將36株肺炎克雷伯菌分為了6個(gè)主要的克隆型,所有菌株攜帶的KPC-2基因均位于耐藥性質(zhì)粒上,質(zhì)粒的大小在40kb到180kb之間不等,部分質(zhì)粒可以通過接合作用轉(zhuǎn)移。并對(duì)其中一株肺炎克雷伯菌所攜帶的質(zhì)粒pKP048進(jìn)行了詳細(xì)的基因序列測(cè)定,獲得了KPC-2基因周圍總長20.2kb的序列。 結(jié)論： 攜帶KPC-2基因耐藥菌株已經(jīng)在國內(nèi)多家醫(yī)院流行,該基因位于一個(gè)由Tn3轉(zhuǎn)座子和Tn4401轉(zhuǎn)座子共同整合而成的復(fù)雜結(jié)構(gòu)上,這種由2個(gè)轉(zhuǎn)座子整合而成的復(fù)雜轉(zhuǎn)移單元很好地揭示了國內(nèi)KPC-2基因的傳播途徑以及遺傳背景。
[Abstract]:Objective: to study the drug resistance characteristics, molecular epidemiology and the surrounding environment of 39 strains of Enterobacteriaceae (Enterobacteriaceae) carrying KPC-2 type carbapenase in 8 hospitals in 6 cities of East China. Materials and methods: 39 enterobacteriaceae strains carrying KPC gene were collected from 8 hospitals in 6 cities of China from March 2006 to December 2007. Etest method was used to determine the minimum inhibitory concentration of 10 common antimicrobial agents, PCR amplification and sequencing were used to detect the carbapenem gene, and the homology among strains was analyzed by pulsed field gel electrophoresis (PGE). The plasmid DNA library was constructed by Southern blotting. The gene sequence of the plasmid was sequenced by bird gun method and the gene structure was analyzed by bioinformatics. Results: all strains showed resistance to carbapenem antibiotics or decreased sensitivity. 36 strains of Klebsiella pneumoniae were divided into 6 major clone types by pulsed field gel electrophoresis. All the KPC-2 genes carried by all strains were located on the resistant plasmids, the size of the plasmids ranged from 40kb to 180kb, and some of the plasmids could be transferred by conjugation. The plasmid pKP048 carried by one strain of Klebsiella pneumoniae was sequenced in detail, and the total length 20.2kb of KPC-2 gene was obtained. Conclusion: the drug-resistant strain carrying KPC-2 gene has been prevalent in many hospitals in China. The gene is located in a complex structure formed by the integration of Tn3 transposon and Tn4401 transposon. This complex transfer unit composed of two transposons well revealed the transmission pathway and genetic background of KPC-2 gene in China.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

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10 汪s，

本文編號(hào)：2170182