【摘要】：該研究探討了趨化因子CX3CL1對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)骨架的影響及其作用機(jī)制。CX3CL1刺激HUVECs后,采用免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞骨架蛋白纖維狀肌動(dòng)蛋白(F-actin)的分布和形態(tài)改變,采用Western blot技術(shù)檢測(cè)胞質(zhì)內(nèi)F-actin和磷酸化促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)的三種亞型[p38、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)]的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,10 nmol/L CX3CL1刺激HUVECs 30 min后,細(xì)胞的致密外周帶逐漸被破壞,胞質(zhì)內(nèi)有應(yīng)力纖維形成;120 min后,外周帶消失,胞質(zhì)內(nèi)有大量的致密應(yīng)力纖維形成;180 min后,胞質(zhì)內(nèi)應(yīng)力纖維減少,少數(shù)細(xì)胞可見致密外周帶。10 nmol/L CX3CL1刺激HUVECs30 min后,F-actin的表達(dá)水平逐漸升高,并于120 min后達(dá)峰值;10 nmol/L CX3CL1刺激HUVECs 1 min后,磷酸化p38、ERK1/2和JNK表達(dá)水平升高,5 min后三者的表達(dá)水平達(dá)峰值;5μg/m L抗CX3CR1抗體抑制10 nmol/L CX3CL1刺激HUVECs后,磷酸化p38、ERK1/2和JNK的表達(dá)水平降低;30μmol/L p38的特異性抑制劑SB203580和ERK1/2的特異性抑制劑PD98059抑制10 nmol/L CX3CL1刺激HUVECs后,胞質(zhì)內(nèi)應(yīng)力纖維減少,應(yīng)力纖維變短,F-actin的表達(dá)水平降低。以上研究結(jié)果表明,CX3CL1能通過p38和ERK1/2信號(hào)通路以時(shí)間依賴方式介導(dǎo)HUVECs細(xì)胞骨架的重構(gòu)。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the effect of CX3CL1 on the cytoskeleton of human umbilical vein endothelial cells (human umbilical vein endothelial cells) and its mechanism. The distribution and morphology of F-actin, a cytoskeleton protein, were detected by immunofluorescence staining after stimulation of HUVECs by CX3CL1. Three subtypes of intracellular F-actin and phosphorylated mitogen-activated protein kinase (mitogen activated protein kinaseshs) [p38, extracellular regulated protein kinase 1 / 2 (extracellular regulated protein kinase 1 / 2 ERK1 / 2) and c-Jun N-terminal kinase (JNK) were detected by Western blot assay. The results showed that after 10 nmol / L CX3CL1 stimulated HUVECs for 30 min, the dense peripheral zone of the cells was destroyed gradually. After the stress fibers were formed in the cytoplasm for 120 min, the peripheral bands disappeared, and a large number of dense stress fibers formed in the cytoplasm for 180 min, and the endoplasmic stress fibers decreased. In a few cells, the expression of F-actin in HUVECs was gradually increased after stimulation of HUVECs 30 min with dense peripheral zone of .10 nmol / L CX3CL1, and reached a peak value of 10 nmol / L CX3CL1 at 120 min after stimulation of HUVECs 1 min. The expression of phosphorylated p38 ERK1 / 2 and JNK in HUVECs increased to a peak of 5 渭 g / mL after 5 min. The anti-CX3CR1 antibody inhibited the stimulation of HUVECs by 10 nmol / L CX3CL1. The expression level of phosphorylated p38 ERK1 / 2 and JNK decreased by 30 渭 mol / L p38, a specific inhibitor SB203580 and ERK1 / 2, and PD98059 inhibited the expression of stress fibers and F-actin in HUVECs stimulated by 10 nmol / L CX3CL1. These results suggest that CX3CL1 can mediate the cytoskeleton remodeling of HUVECs in a time-dependent manner through p38 and ERK1 / 2 signaling pathways.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院腎內(nèi)科;
【基金】：重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(批準(zhǔn)號(hào):2012-1-034)資助的課題~~
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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2 梅，

本文編號(hào)：2135334